| 研究課題/領域番号 |
19590613
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| 研究機関 | 国立感染症研究所 |
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研究代表者 |
石井 孝司 国立感染症研究所, 国立感染症研究所ウイルス第二部, 室長 (40280763)
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| 研究分担者 |
武田 直和 国立感染症研究所, ウイルス第二部, 室長 (90132894)
李 天成 国立感染症研究所, ウイルス第二部, 主任研究官 (90370957)
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| キーワード | E型肝炎 / E型肝炎ウイルス(HEV) / クローニング / cDNA / 感染性クローン / レプリコン / 阻害剤 / スクリーニング |
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| 研究概要 |
昨年度は、一昨年度に取得した培養細胞系で増殖することができるHEVクローンからRT-PCR法を用いて本クローンのcDNAをクローニングし、接続して全長クローンを作成した。定量PCR装置を用いた高感度HEV RNA測定系の確立にも成功した。一方、感染細胞の培養上清をカニクイザルに接種し本クローンの動物モデルへの感染性の検討を行ったところ、サル便中に粒子の放出が確認され、本クローンがサルに感染性であることが証明された。また、培養上清中の粒子からウイルスRNAを精製しヒト肝臓由来細胞にトランスフェクションしたところウイルスの増殖と粒子の培養上清中への放出が確認され、RNAも感染性であることが示された。現在本クローンよりRNAを合成し、培養細胞に導入して感染性を示すかどうかの確認を行なっており、クローンの感染性が確認できれば、reverse geneticsの手法を用いてHEVの増殖に重要な領域を調べることが可能になる。また、全長クローンの構造蛋白をコードする領域を薬剤耐性遺伝子に置換したレプリコンを作成し、RNAを合成して培養細胞に導入して薬剤耐性細胞の樹立に成功した。HEV増殖阻害剤のスクリーニングを本細胞を用いて行なうことができ、簡便に阻害剤のスクリーニングが行なえると考えられる。
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