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研究代表者らはGab1/Gab2心筋特異的二重欠損マウスを作成して、このマウスがneuregulin-1/ErbBシグナル依存性の心筋細胞でのシグナル異常を有するのみならず、その下流でangiopoietin-1(Ang1).分泌に障害を持つことにより心臓組織内の心内膜弾性繊維化と異常拡大血管像を呈することを以前に報告した。心筋細胞由来のneuregulin-1依存性のAng1分泌が心不全予防において果たす役割を解明する目的で、Ang1臓器特異的欠損マウスの作成を本年度も進めた。Cre-loxPシステムを用いて遺伝子破壊を可能とするAng1floxマウスを作成するため、まず第1エクソンをloxP配列で挟んだtargeting vectorを作成して、TT2のES細胞にエレクトロポレーション法で導入し、相同組み換えした細胞をネオマイシン耐性でスクリーニングして得た。さらにCD-1をホストとして組み換えES細胞をインジェクションしてAng1floxキメラマウスを作成した。Ang1floxアレルがgermline transmissionした個体を得た後、CAGプロモーター下で酵母由来Flippaseを発現するCAG-FLPeトランスジェニックマウスと交配してFRTサイトで挟まれたネオマイシン耐性遺伝子を外したAng1floxマウスを得ることに成功した。このAng1floxマウスと心筋特異的にCreレコンビナーゼを発現する2系統のマウス(a-MHC-Cre及びa-MHC-MerCreMerトランスジェニックマウス)と交配して、心筋特異的Ang1欠損マウスを作出した。
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