Desert Hedgehog遺伝子変異による末梢神経障害の病態解明と治療法開発

2007 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 19591000
• 研究機関: 鹿児島大学
• 研究代表者: 梅原 藤雄 鹿児島大学, 大学院・医歯学総合研究科, 講師 (20271140)
• 研究分担者: 橋口 照人 鹿児島大学, 大学院・医歯学総合研究科, 准教授 (70250917) ; 有村 公良 鹿児島大学, 大学院・医歯学総合研究科, 准教授 (20159510)
• キーワード: Desert hedgehog / 遺伝子治療 / 末梢神経障害

研究概要

目的:
本研究は、Dhh発現プラスミドの移入による末梢神経障害の新たな治療法の開発を目的とする。
方法:
1. ヒトDhh遺伝子発現プラズミド(phDhh)の作成
ヒトDhh遺伝子amino-terminal domain coding sequenceをpCMV-Script PCR mammalian expression vector (Stratedgene)に組み込んだ。以下の3種類のプラズミドを作成した。86:Dhh N末端がストップコドン、87:Dhh N末端にHisを6個標識、最後がストップコドン、Dhh-myc:Dhh N末端にmycを標識し、最後がストップコドン。
2. Dhh蛋白発現及び分泌の確認
3種のDhh遺伝子を組み込んだpCMV-Script PCR mammalian expression vectorをCOS細胞にtransfectionし、そのcell lysate及びculture supernatantを用いて、Western blotを行った。
結果及び考察
Cell lysate及びculture supernatantにおいて、Western blotで約19kDaの蛋白を確認した。これらは抗His抗体及び抗Myc抗体によってそれぞれ特異的に認識された。この結果により、このDhh発現ベクターをtransfectionした細胞において、Dhh蛋白(N末端)を産生・分泌することを確認した。今後、このプラスミド(phDhh)を種々の末梢神経障害モデル(局所挫滅モデル、糖尿病性末梢神経障害、実験的自己免疫性末梢神経炎)に対して、局所注入することにより、神経再生効果について検討する予定である。
結輪
Dhh発現プラズミド(phDhh)の作成に成功した。このプラズミドのtrasfectionにより、Dhhの産生・分泌が誘導出来る。

研究成果

• [雑誌論文] Inclusion body myositis associated with human T-lymphotropic virus-type I infection: eleven patients from an endemic area in Japan. (2008)
  • 著者名/発表者名: Matsuura E, Umehara F*, Nose H, Higuchi I, Matsuoka E, Izumi K, Kubota R, Saito M, Izumo S, Arimura K, Osame M.
  • 雑誌名: J Neuropathol Exp Neurol 67 ページ: 41-49
  • 査読あり
• [雑誌論文] Enlarged, multifocal upper limb neuropathy with HTLV-I associated myelopathy in a patient with chronic adult T-cell leukemia. (2008)
  • 著者名/発表者名: Umehara F, Hagiwara T, Yoshimura M, Higashi K, Arimura K
  • 雑誌名: J Neurol Sci 266 ページ: 167-170
  • 査読あり
• [雑誌論文] Expression of the heparin-binding growth factor midkine in the cerebrospinal fluid of patients with neurological disorderS. (2008)
  • 著者名/発表者名: Yoshida Y, Ikematsu S, Muramatsu H, Sakakima H, Mizuma N, Matsuda F, Sonoda K, Umehara F, Ohkubo R, Matsuura E, Goto M, Osame M, Muramatsu T.
  • 雑誌名: Intern Med 47 ページ: 83-89
  • 査読あり
• [雑誌論文] Abnormalities of spinal magnetic resonance images implicate clinical variability in human T-cell lymphotropic virus type I-associated myelopathy. (2007)
  • 著者名/発表者名: Umehara F, Nose H, Saito M, Fukuda M, Ogino M, Toyota T, Yuhi T, Arimura K, Osame M.
  • 雑誌名: J Neurovirol 13 ページ: 260-267.
  • 査読あり
• [学会発表] Desert hedgehog遺伝子移入による末梢神経障害治療法の開発 (2007)
  • 著者名/発表者名: 梅原藤雄、白濱ゆう子、有村公良 川原幸一、橋口照人、丸山征郎 楯 玄秀
  • 学会等名: 平成19年度厚生労働省 難治性ニューロパチーの病態に基づく新規治療法の開発 研究班会議
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2007-12-06