| 研究課題/領域番号 |
19591317
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| 研究機関 | 大分大学 |
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研究代表者 |
藤原 作平 大分大学, 医学部, 教授 (90181411)
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| 研究分担者 |
岡本 修 大分大学, 医学部, 講師 (40284799)
後藤 瑞生 大分大学, 医学部, 助教 (70433050)
住吉 秀明 大分大学, 医学部, 助教 (60343357)
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| キーワード | エピプラキン / 表皮細胞 / ケラチン / 結合蛋白質 |
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| 研究概要 |
エピプラキンは、自己免疫性表皮下水疱症の自己抗原として同定された表皮細胞内分子であり、その一次構造ならびに遺伝子構造は既に明らかになった。さらにスロットプロット・アッセイを用いたin vitro相互作用の実験からエピプラキンは、ケラチン、ビメンチンとの相互作用することが明らかになった(J Dermatol 2006)。本研究では、実際に中間径フィラメントとエピプラキンとが結合しているか否かと、中間径フィラメント以外の分子との結合の有無とを調べ、その機能を明らかにしたい。
エピプラキンと中間径フィラメントとの細胞内での動態を調べるために、まず創傷治癒過程におけるマウス表皮において、共焦点レーザー顕微鏡観察、ついで免疫電子顕微鏡観察を行なった。創傷治癒過程では、4-6日目に創端の増殖表皮細胞の基底細胞層から上方に強い発現が見られたが、8日目に減弱し、10日では正常に復した。創は6-8日で治癒したが、創面を伸長する表皮先端には発現が見られなかった。免疫電子顕微鏡観察では、創傷部の増殖表皮細胞において、4-6日目にケラチン6、10の混合した太い線維の周囲にエピプラキンが見られた。このケラチン線維は2日目では、塊状として見られ、2日目以降にエピプラキン存在下で線錐に再構築されるものと推定された。しかしエピプラキンノックアウト表皮細胞では、ケラチン線維は太くなく、また綱胞膜と平行に走行する線維として観察された。このことからエピプラキンの機能は、ケラチン線雑を束ねて強度を与える役割を果たしていると考えられた。
ファーウエスタンブロット法によるエピプラキン結合蛋白質の探索は、実施しえなかったので、平成20年度に計画している。
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