| 研究概要 |
本研究ではThrombin receptorであるProtease-activated receptor(PAR)の腎での遺伝子発現と機能解析を行い、受容体阻害からの尿路結石症の発生抑制を明らかとすることを目的とした。
1)ヒト腎尿細管培養細胞HK-2細胞を用いたPCRではPAR1,2,3,4すべてのsubtypeの遺伝子発現を確認した。
Western blotではPAR1,2のタンパク発現を確認した。
加えて共焦点レーザー顕微鏡を用いた免疫蛍光染色ではHK-2細胞の細胞膜およびゴルジ小体に陽性所見を認めた。
PRISM7700によるreal time RT-PCRによる解析では蓚酸刺激(蓚酸濃度0.1～0.8mM)によるPAR1,2,3,4遺伝子発現のup regulationを検証した。
2)ヒト腎組織での免疫組織染色では近位および遠位尿細管に陽性所見を認め培養細胞での結果を反映する所見を確認した。
3)腎尿細管細胞でのPARのシグナル伝達の有無を細胞内カルシウムイオン変動とInterleukin 6(IL-6)産生から検討した。
蛍光probeとしてfura-2/AMを使用し細胞内Caイオン濃度の変化をAQUA COSMOSにて解析した。α-thrombin添加によりHK-2細胞内カルシウムイオンの変動を認めた。
また蓚酸負荷(蓚酸濃度0.1～0.4mM)によってIL-6の産生が認められた。
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