| 研究概要 |
平成20年度はVasopressinのAortaへの効果とNitrotyrosineの発現の測定の2つの実験を行った。
1.Vasopressin投与によるAorta径への影響
作成した盲腸穿孔モデルからAortaを取り出し、Isometric transducer (Kent社製)の固定。コントロールの長さを記録した後に、VasopressinとInducible Nitric Oxide Inhibitor投与してAortaの長さを記録した。Vasopressin単独投与ではAorta径は変化しなかったが、L-NILを同時投与でAorta径に著明に収縮した。
2.Western Blot法によるNitrotyrosine定量
RatのAortaを取り出し、RatのAorta組織のホモジネートを実施。その組織はBeckman遠心器を利用して100、000xg.60分でP2分画に精製分離し、Bradford法でタンパク定量。その精製したP2文画を利用してSDS-PAGEとImmunobotting法(Western Blot法)を用いてNitrotyrosineの定量を行った。20μgに分割したP2分画を電気泳動(Boi-Rad社製Immune Blot Kit)に流してNitrotyrosineを分離し、それをNitrocellulose膜に転写。200倍に希釈した1次抗体である抗Nitrotyrosine抗体,(Sigma 社製品)を投与し、Avidin-Biotin Complex (ABCkit)を投与し発色させ、発色した部位をDensitometryで解析した。NitrotyrosineはAorta内皮に多く発現していることを観察した。
以上の観察結果の意義としては、VasopressinのAortaへの効果にはNOが重要な因子であることを発見した。
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