| 研究概要 |
ヒスタミン(HA)は,H_3受容体(H_3R)を介してHA神経系ばかりでなく,モノアミン神経系の神経活動も制御していると考えられているが,HAがモノアミントランスポーター輸送活性に影響しているか否かについては明らかでない。われわれは前年度にH_3Rを介してノルアドレナリントランスポーター(NET)輸送活性が抑制されること,セロトニントランスポーターはNETやドパミントランスポーター(DAT)よりもHAによる抑制が小さいことを報告した。したがって本年度は,特にNET発現とH_3Rの関連に焦点を絞り,細胞発現系でのH_3Rを介したNETの輸送活性および細胞膜発現に対する影響を検討した。
NETおよびDAT輸送活性の評価は,hNET1 or hDAT/rH_3R遺伝子導入COS-7細胞を用い,[^3H]ラベルした基質の取り込みをシンチレーションカウンターで測定することにより行った。NET蛋白質の発現はhNET1抗体を用いたウエスタンブロットにより,H_3R発現はc-Myc抗体による細胞免疫染色により,さらに蛋白質相互作用は免疫沈降法により検討した。
H_3R遺伝子導入COS-7細胞では対照群と比べNETおよびDAT輸送活性が低下した。一方,受容体機能を欠失していると考えられる新規H_3Rスプライシングバリアント遺伝子の導入ではNET/DAT輸送活性の低下は抑制された。この機構をまずNETの機能および膜発現に分けて検討したところ,成熟NET発現は細胞質および細胞膜画分で減少しており,さらにNETとH_3Rの細胞内での蛋自質相互作用が認められた。また,H_3R発現を認めたPC12細胞でH_3RアゴニストによるNET mRNAの発現変動を認めた。以上よりH_3Rを介するNETの機能制御機構の存在が確認されるとともに,NETとH_3Rの蛋白質相互作用およびH_3Rシグナルを介するNET発現制御機構の存在の可能性が示唆された。
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