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2008 年度 実績報告書

チタニアカラムを用いたハイスループットホスホプロテオーム解析法の開発

研究課題

研究課題/領域番号 19651085
研究機関新潟大学

研究代表者

堀米 恒好  新潟大学, 自然科学系, 教授 (60053352)

キーワードホスホプロテオーム / リン酸化ペプチド / チタニアカラム / ホスホプロテオミクス / リン酸化プロテオーム / リン酸化ペプチド精製装置
研究概要

1.チタニアカラムに結合する非リン酸化ペプチドの除去法の検討の継続。
アフリカツメガエル卵抽出液のタンパク質混合物のトリプシン分解物をチタニアカラムに添加した後種々の洗浄法、洗浄溶媒その他を適用し次のような結果を得た:1)イソプロパノールによる洗浄が有効である、2)3-サイクル洗浄法が有効である、3)高感度の質量分析計(MS)の使用が有効である。そこでこれらの方法を組み合わせて洗浄/分析条件を最適化し、これまでフリカツメガエル卵抽出液タンパク質のトリプシン分解物から288本のリン酸化ペプチドしか検出できなかったものを、1382本のリン酸化ペプチドを検出できるまでに精製度の上昇と大幅な高感度化に成功した。
2.精製リン酸化ペプチドの内部アミノ酸配列同定法の検討。
これまでは得られたリン酸化ペプチドのアミノ酸配列は調べていなかったが、精製リン酸化ペプチドをLC-MS/MS法で内部アミノ酸配列を解析して、アフリカツメガエル卵抽出液タンパク質のトリプシン分解物から、338本のリン酸化ペプチドのアミノ酸配列を同定できるようになった。
3.全自動装置の構築
これまでの結果は新たに構築した全自動リン酸化ペプチド精製装置を用いた結果であることから、この装置を用いることにより全自動でリン酸化ペプチドの精製ができることが示された。
4.学会発表で研究結果を公表するとともに、精製法と精製装置について特許出願した。

  • 研究成果

    (2件)

すべて 2008

すべて 学会発表 (1件) 産業財産権 (1件)

  • [学会発表] チタニアカラムを用いた全自動リン酸化ペプチド精製法の改良と応用2008

    • 著者名/発表者名
      堀米恒好, 他4名
    • 学会等名
      日本生化学会大会
    • 発表場所
      神戸
    • 年月日
      2008-12-09
  • [産業財産権] リン酸化ペプチドの精製方法及び精製装置2008

    • 発明者名
      堀米恒好岩瀬由佳
    • 権利者名
      新潟大学
    • 産業財産権番号
      特許、特願2008-122156
    • 出願年月日
      2008-05-08

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公開日: 2010-06-11   更新日: 2016-04-21  

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