| 研究課題/領域番号 |
19659245
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| 研究機関 | 大阪大学 |
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研究代表者 |
織谷 健司 大阪大学, 医学系研究科, 講師 (70324762)
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| 研究分担者 |
金倉 譲 大阪大学, 医学系研究科, 教授 (20177489)
松村 到 大阪大学, 医学系研究科, 准教授 (00294083)
水木 満佐央 大阪大学, 医学部附属病院, 准教授 (80283761)
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| キーワード | 細胞内カルシウム / STIM / チャネル / サイトカイン / 免疫 / シグナル |
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| 研究概要 |
我々が最初に発見したSTIMは、細胞外領域にEF-handドメインやSAMドメインを持ち、現在確認されている唯一のSOC Ca2+センサーとして注目されている。我々は、STIMを中心としたSOC Ca2+流入調節に関わる分子機構を解明することを目的として、STIMに結合する分子の網羅的解析を試みた。EF-handドメインにアミノ酸変異を持ちCa2+結合能を欠くSTIM(mu-STIM)や野生型STIM(WT-STIM)各蛋白のC端領域にFLAG配列をつけた融合蛋白を作製するウイルスベクターを作製した。また、nano flow LC/MSによるペプチド解析・MASCOTによるデータ分析の手法を習得した。mu-STIM or WT-STIM-FLAG融合蛋白をHela細胞・293T細胞・Jurkat細胞に発現させcell lysateを作製し、抗FLAG抗体結合ビーズにて免疫沈降した。各免疫沈降物を電気泳動し、特異的バンドを回収し、ペプチド解析を行った。回収したバンドの一部はSTIM自身であった。本実験系を進めることにより、複数のSTIM会合蛋白の候補分子を同定でき、STIMを中心としたSOC Ca2+流入調節機構の解明に繋げることが可能であると考えられた。
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