| 研究概要 |
ヒト乳がん組織のmRNAよりcDNAライブラリーを構築し、EST data baseより得た塩基配列情報をもとに作成したPCR productをプローブとしてスクリーニングした。結果、単一のクローン(新規トランスポーター);human nucleoside transporter1(hNT1))を単離した。hNT1のKyte&Doolittle analysisの結果、推定二次構造で3回膜貫通を有していた。hNT1に相補的なRNA(cRNA)を作成し、その約50ngをアフリカツメガエル卵母細胞に実体顕微鏡下マイクロインジェクションしhNT1の機能解析を行った。hNT1の薬剤取り込み実験(MTX,PGE2,Taxol,DHEA-S,5-FUなど)では、hNT1は特に抗がん剤5-FUを細胞内に輸送することを発見した。5-FUのさまざまな輸送実験の結果、hNT1は濃度依存性・時間依存性・pH依存性・Na非依存性のトランスポーターであることを証明した。また、5-FUを基質としたcis阻害実験では、cisplatinとetoposideで阻害された。
倫理委員会の承認下で、当院で切除された乳がん標本に免疫染色を行い、hNT1が正常乳管上皮細胞と乳癌組織に発現していることを証明した。女性の70%にhNT1遺伝子が正常乳管上皮細胞および乳腺に発現し、乳癌患者の30%にhNT1が発現していた。hNT1の遺伝子発現には、正常乳腺/乳がん:(+)/(+)、(+)/(-)、(-)/(-)の3つのパターンがあることが予想された。
またhNT1のホモログであり、タキソールの輸送に関与する新規遺伝子を単離することを同手法で行い、B-Ca472新規遺伝子を単離に成功した。全長1581bp、アミノ酸数526個、推定分子量60.4kDaであった。今後アフリカツメガエル卵母細胞を用いてB-Ca472の機能解析を行う。
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