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HGFプラスミドヘのネオマイシン耐性遺伝子の導入に成功し、ネオマイシン添加によりHGF遺伝子が導入された細胞の選別が可能となった。遺伝子導入により細胞シートの作成が可能か懸念されたが、HGF導入中皮細胞でも、細胞のみから構成されるHGFシート(HMCS+HGF)のにした。このHGFの放出は、HGF遺伝子無の細胞シート(HMCS)ではHGFの放出がOpg/mlであるのに対して、HMCS+HGFでは約240pg/mMであり、文献値のラット腹膜中皮細胞での80pg/mlの約3倍を示した。よって、リポフェクタミン2000を用いて安定したHGF導入ヒト中皮細胞株を作成し、冷凍保存することに成功した。この手法は細胞シートが作製可能であれば、HGF遺伝子導入した細胞でも細胞シートの作製が可能であることを示唆する重要な知見であり、目的の通りHGFと組織工学を組み合わせた意義ある手法を得ることができた。
次にヌードマウスにクロロヘキシジンを連続7日間腹腔内に投与し、中皮の脱落と腹膜の肥厚を伴う腹膜傷害モデルを新たに作成した。連日投与7日間のため、モデル作成の期間が短く評価できる特徴を有する。この腹膜傷害マウスにHMCSを移植した。移植後1週間では、移植した中皮細胞シートの上下に、ホストの細胞が覆う部位が観察された。この観察が回復過程なのか異種間(マウスーヒト細胞)のためかは現在検討中である。これらの結果より、今回開発した腹膜傷害マウスにおいても中皮細胞シートの移植後、少なくとも1週間は評価が可能であった。本モデル開発により腹膜傷害部位への移植が可能であり、今後のHMCS+HGFでの移植評価の研究で、非常に重要な知見を得た。
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