タンパク質の特異的蛍光ラベル化法の開発とそのバイオイメージングへの応用

2008 年度 研究成果報告書

• 研究課題/領域番号: 19790094
• 研究種目: 若手研究(B)
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 創薬化学
• 研究機関: 名古屋市立大学
• 研究代表者: 梅澤 直樹 名古屋市立大学, 大学院・薬学研究科, 准教授 (40347422)
• 研究期間 (年度): 2007 – 2008
• キーワード: 蛍光標識 / タンパク質 / ペプチドタグ / ヒスタグ / 蛍光色素

研究概要

本研究では、新規タンパク質蛍光ラベル化試薬を開発した。ヒスタグと呼ばれる短いペプチドと金属錯体との選択的かつ強固な結合を利用した。開発した試薬は、タンパク質との結合に伴い、蛍光強度が増大するという特長を持つ。同一の原理に基づき、紫外光励起可能なNTAC類と可視光励起可能なNTAF類の2群の新規試薬を開発した。これらの試薬は、ヒスタグを持つペプチド/タンパク質と選択的に結合し、蛍光強度が増大した。

研究成果

• [雑誌論文] Turn-on fluorescent probe with visible light excitation for labeling of hexahistidine tagged protein (2009)
  • 著者名/発表者名: M. Kamoto, N. Umezawa, N. Kato T. Higuchi
  • 雑誌名: Bioorg. Med. Chem. Lett. 19 ページ: 2285-2288
  • 査読あり
• [雑誌論文] Extreme rate acceleration by axial thiolate coordination on the isomerization of endoperoxide catalyzed by iron porphyrin: relevance to prostaglandin H2 isomerase catalysis (2008)
  • 著者名/発表者名: T. Yamane, K. Makino, N. Umezawa, N. Kato, and T. Higuchi
  • 雑誌名: Angew. Chem. Int. Ed. 47 ページ: 6438-6440
  • 査読あり
• [雑誌論文] Array-based fluorescence assay for serine/threonine kinases using specific chemical reaction (2008)
  • 著者名/発表者名: S. Akita, N. Umezawa, N. Kato, and T. Higuchi
  • 雑誌名: Bioorg. Med. Chem. 16 ページ: 7788-7794
  • 査読あり
• [雑誌論文] Novel probes showing specific fluorescence enhancement on binding to hexahistidine tag (2008)
  • 著者名/発表者名: M. Kamoto, N. Umezawa, N. Kato, and T. Higuchi
  • 雑誌名: Chem.-Eur. J. 14 ページ: 8004-8012
  • 査読あり
• [雑誌論文] A versatile strategy for the synthesis of crown ether-bearing heterocycles : discovery of calcium-selective fluoroionophore (2007)
  • 著者名/発表者名: Y. Aoki, N. Umezawa, Y. Asano, K. Hatano, Y. Yano, N. Kato, T. Higuchi
  • 雑誌名: Bioorg. Med. Chem. 15 ページ: 7108-7115
  • 査読あり
• [雑誌論文] キナーゼ活性の蛍光検出 (2007)
  • 著者名/発表者名: 梅澤直樹、樋口恒彦
  • 雑誌名: 蛋白質核酸酵素 52 ページ: 1601-1607
• [雑誌論文] アミノ酸、ペプチドの化学的性質を利用した生体高分子の選択的認識と検出 (2007)
  • 著者名/発表者名: 梅澤直樹、秋田昌二、鴨東美絵、樋口恒彦
  • 雑誌名: 薬学雑誌 127 ページ: 1915-1925
• [学会発表] ヒスタグ配列を認識する発蛍光型蛍光試薬の開発 (2009)
  • 著者名/発表者名: 鴨東美絵、梅澤直樹、加藤信樹、樋口恒彦
  • 学会等名: 日本薬学会第129年会
  • 発表場所: 京都
  • 年月日: 2009-03-27
• [学会発表] Fluorescence assay for serine/threonine kinases using specific chemical reaction (2008)
  • 著者名/発表者名: Naoki Umezawa, Shoji Akita, Nobuki Kato, and Tsunehiko Higuchi
  • 学会等名: 236th ACS National Meeting & Exposition
  • 発表場所: Philadelphia, USA
  • 年月日: 20080818-19
• [学会発表] ヒスタグペプチド配列を認識し発蛍光する蛍光試薬の開発 (2008)
  • 著者名/発表者名: 鴨東美絵、梅澤直樹、加藤信樹、樋口恒彦
  • 学会等名: 第3回バイオ関連合同シンポジウム
  • 発表場所: 東京工業大学すずかけ台キャンパス(神奈川)
  • 年月日: 2008-09-18
• [学会発表] Novel probes showing specific fluorescence enhancement on binding to hexahistidine tag (2008)
  • 著者名/発表者名: Mie Kamoto, Naoki Umezawa, Nobuki Kato, and Tsunehiko Higuchi
  • 学会等名: 236th ACS National Meeting & Exposition
  • 発表場所: Philadelphia, USA
  • 年月日: 2008-08-19
• [学会発表] アミノ酸、ペプチドの化学的性質を利用した生体高分子の選択的認識と検出 (2008)
  • 著者名/発表者名: 梅澤直樹
  • 学会等名: 第41回若手ペプチド夏の勉強会
  • 発表場所: 京都
  • 年月日: 2008-08-04
• [学会発表] Efficient fluorescence assay for serine/threonine kinases (2007)
  • 著者名/発表者名: N. Umezawa
  • 学会等名: AIMECS2007
  • 発表場所: Istanbul, Turkey
  • 年月日: 2007-07-10
• [産業財産権] ペプチド又は蛋白質標識用の蛍光色素 (2008)
  • 発明者名: 梅澤直樹、鴨東美絵、樋口恒彦
  • 権利者名: 公立大学法人名古屋市立大学
  • 産業財産権番号: 特願 2008-208933
  • 出願年月日: 2008-08-14