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消化管からのコレステロール吸収は生体内の脂質恒常性維持に重要な役割を果たし、脂質トランスポーター分子の相次ぐ発見・新規高脂血症治療薬エゼチミブの誕生により、ここ数年で急速に研究が進んでいる。本研究においては、小腸上皮細胞の管腔側膜においてコレステロール・植物性ステロールの胆汁ミセルからの吸収に働き、エゼチミブの薬効標的でもあるNiemann-Pick C1-like 1(NPC1L1)が多層的な発現調節を受けているという仮説のもと、特に転写調節・翻訳後調節に着目して研究を進めている。
本年度は、転写調節研究に関してはコレステロール依存的制御の解析を重点的に行い、翻訳後調節に関してはInsigのクローニングおよび各種タグ付き発現ベクターへの組み込みを行った。
in vivo・in vitro実験においてコレステロール量とNPC1L1 mRNA発現量に負の相関が観察されたため、転写調節領域を用いたレポータージーンアッセイ・ゲルシフトアッセイにより詳細に検討した結果、ヒトNPC1L1のコレステロール依存的発現調節にはSREBP2・HNF4αが関与し、この制御にはHNF4αの5'-上流域への結合が必要であることが明らかとなった。
NPC1L1-Insig相互作用に関しては、Insigの二つのアイソフォームであるInsig-1およびInsig-2のクローニングに成功し、すでに蛍光蛋白およびエピトープタグとの融合蛋白発現用ベクターへの組み込みを完了している。今後は免疫沈降・ウェスタンブロット・免疫染色等を行い検討を進めていく。
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