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昨年までに、グルタミン酸トランスポーターファミリーの中で、EAAC1のみを発現している培養細胞HEK293細胞を用いて、GTRAP3-18がEAAC1によるシステインの取り込みを制御する因子であることを明確にすることができた。そこで本年は、実際の神経細胞においてもGTRAP3-18がEAAC1によるシステインの取り込みを制御する因子であるか否かについて、初代神経培養細胞系およびマウス脳室内投与系を用いて検討を行った。グルタミン酸トランスポーターの阻害剤を用いた結果、初代神経培養細胞内のグルタチオン濃度はEAAC1のみに依存していることが確認された。次に、GTRAP3-18が実際に細胞膜上でEAAC1と結合して機能していることを、EAAC1とGTRAP3-18に対する特異抗体および蛍光標識抗体を用いた免疫細胞化学的解析を行った結果、形態学的にGTRAP3-18は神経細胞膜上でEAAC1と結合していることが確認された。さらに、細胞膜表面タンパク質のビオチン化法を用いて細胞膜表面タンパク質画分を調製した結果、生化学的にもGTRAP3-18が細胞膜上でEAAC1と結合していることが確認された。そして、アンチセンスオリゴヌクレオチドおよびsiRNAを用いて、GTRAP3-18の発現を抑制したときのグルタチオン濃度を調べた結果、GTRAP3-18は初代神経培養細胞内およびマウス脳内グルタチオン濃度を負に制御していることを明らかにすることができた。以上のごとく平成20年度は神経細胞においてGTRAP3-18がEAAC1によるシステインの取り込みを制御する因子であることを明確にすることができた。
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