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2007 年度 実績報告書

酸化脂質ライブラリーを用いた新規酸化脂質受容体の同定と生理機能の探索

研究課題

研究課題/領域番号 19790204
研究機関群馬大学

研究代表者

大日方 英  群馬大学, 大学院・医学系研究科, 助教 (50332557)

キーワード受容体 / 脂質 / 酸化
研究概要

本研究の目的はリノール酸、アラキドン酸、ドコサヘキサエン酸などの多価不飽和脂肪酸に由来する酸化脂質をターゲットとしたオーファンGPCRのリガンドスクリーニングを行い、受容体を同定することを通して新たな生理活性をもつ酸化脂質を発見することである。そのために、本年度は以下のような実験を行い、成果を得た。
-候補となるオーファンGPCRの選択と安定発現細胞株の作製-
アミノ酸配列の相同性に基づいた系統樹解析から、脂溶性の物質をリガンドとする可能性が高いと予想されるオーファン受容体を10個選定した。定法により受容体を安定的に発現するCHO細胞を樹立した後、受容体のN末端に付与したFLAGタグを免疫染色し、フローサイトメトリーによる解析で受容体の発現量が高いクローンを各受容体につき数個ずつ選択した。
-酸化脂質ライブラリー作製のための条件検討-
本研究ではリノール酸(C18:2)、α-リノレン酸(C18:3、n-3系列)、γ-リノレン酸(C18:3、n-6系列)、アラキドン酸(C20:4)、エイコサペンタエン酸(C20:5)、ドコサヘキサエン酸(C22:6)およびこれらを構成成分として持つリン脂質を基質としてin vitroで酸化反応を行い、酸化脂質ライブラリーを作製し、リガンドスクリーニングに用いる予定である。本年度は、酸化脂質ライブラリー作製の条件検討を行った。酸化反応として、二価金属イオン(Cu2+またはFe2+)を用いた反応もしくはラジカルイニシエーター試薬を用いた反応を行い、反応時間を変化させることにより様々な程度に脂質を酸化させ、薄層クロマトグラフィー分析などにより酸化条件の至適化を行った。

  • 研究成果

    (6件)

すべて 2008 2007

すべて 雑誌論文 (3件) (うち査読あり 3件) 学会発表 (3件)

  • [雑誌論文] G2A plays proinflammatory roles in human keratinocytes under oxidative stress as a receptor for 9-hydroxyoctadecadienoic acid2008

    • 著者名/発表者名
      Tomoyasu Hattori, et. al.
    • 雑誌名

      Journal of Investigative Dermatology 128

      ページ: 1123-1133

    • 査読あり
  • [雑誌論文] プロトン感知性GPCR研究の展開2008

    • 著者名/発表者名
      大日方 英, ら
    • 雑誌名

      生化学 80

      ページ: 113-118

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Morphine is an exogenous ligand for MrgX2, a G protein-coupled receptorfor cortistatin2007

    • 著者名/発表者名
      Natsuyo Akuzawa, et. al.
    • 雑誌名

      Journal of Cell and Animal Biology 2

      ページ: 4-9

    • 査読あり
  • [学会発表] Gタンパク質共役型受容体G2Aのスプライシングバリアントの同定と機能解析2007

    • 著者名/発表者名
      小川 愛, ら
    • 学会等名
      第30回日本分子生物学会年会、第80回日本生化学会大会合向大会
    • 発表場所
      横浜
    • 年月日
      2007-12-14
  • [学会発表] 表皮角化細胞におけるGタンパク質共役型受容体G2Aの生理作用2007

    • 著者名/発表者名
      大日方 英、服部 友保、小川 愛、平野 瞳子、陳 可欣、Melisa Intan Barliana、岸 美紀子、立井 一明、和泉 孝志
    • 学会等名
      第49回脂質生化学会
    • 発表場所
      札幌
    • 年月日
      2007-06-05
  • [学会発表] G2A mediates signals of oxidized free fatty acids in human keratinocytes2007

    • 著者名/発表者名
      Hideru Obinata, Tomoyasu Hattori, Ai Ogawa, Kazuaki Tatei, and Takashi Izumi
    • 学会等名
      3rd International conference on phospholipase A2 and lipid mediators
    • 発表場所
      Italy
    • 年月日
      2007-05-09

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公開日: 2010-02-04   更新日: 2016-04-21  

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