| 研究概要 |
現在,HIV潜伏感染はAIDSにおける最も大きな問題の一つであるが,潜伏感染に対する有効な治療手段はなく,潜伏感染に関する基礎研究は緊急の課題となっている。我々はこれまでに,AP-4がHDACをLTRヘリクルートすることによりクロマチンレベルで潜伏感染維持に関与していることを報告した。今回の研究課題ではHIV潜伏感染機構の成立と破綻のメカニズムを転写レベルでより解明するために,LTRに結合するAP-4を含む複合体や新たなHIV抑制因子の同定と,それら抑制因子の遊離機構に関して研究を行った。まずHIV潜伏感染に関わる新たな分子の同定のために,LTR DNAカラムとHela細胞の核抽出液を用いたDNA-蛋白結合実験を行った。LTR配列,AP-4などの結合配列を変異させた変異オリゴを作成後,DNA結合ビーズを作成,Handee Mini-Spin Columnを用いてDNA結合ビーズと核抽出液をインキュベーションし相互作用反応を行った。溶出液をSDS PAGE後,銀染色を行った結果,LTRに結合しうる因子として数本のバンドが確認できた。現在,反応・泳動条件を再検討し追試実験で同様のバンドが得られるか否か確認している。実験の再現性が確認できたところで,質量分析による蛋白同定を行う予定である。また,本研究を遂行する過程で,新たにT-cell分化等に関わるSchnurri-2がLTRのNF-kBサイトに結合し,NF-kBの活性化を阻害することによりHIVの複製を抑制していることを見出した。潜伏感染の破綻機構としては,グラム陰性菌がLTRのクロマチンリモデリングを介してHIVを活性化するということがわかり,現在実験を継続中である。また,共同研究としてHIVの抑制因子であるRAIがSp1を抑制することにより胎盤の分化に関わっていることを報告した。(Endocrinology.148(12),p5803,2007
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