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研究の目的
本研究では高血圧症、糖尿病、虚血腎などの各種病態でその進行にangiotensinII(AII)が関わるAIIの尿細管作用を解明することを目的とする。具体的にはAIItype1受容体(AT1)とAIItype2受容体A(T2)の2つのサブタイプ毎に尿細管特異的Cre-loxP/ROSA26-rtTA-GFP発現系を用い、doxycycline投与で任意にAT1/AT2の発現を変えられるトランスジェニック(TG)マウスを作製し、このTGマウスを用いた高血圧、糖尿病、虚血腎モデルでの検討を加えることで明らかにする。各種病態でのAT1、AT2作用の検討から、特にAT1を介したAIIの病態促進的な作用へのAT2の拮抗的作用の本態を明らかとし、AT2、AT1とAT2のシグナル伝達系、AIIの細胞内輸送系等を標的とした治療法開発への応用を目指す。
<平成20年度>トランスジェニックマウスの作製と系統の樹立
1. 近位尿細管特異的rtTA/GFP蛋白発現マウスの作製
ROSA-rtTA-IRES-GFPマウス(Cre-enzyme発現臓器でのみrtTA蛋白とGFP蛋白が発現するTGマウス)とsglt2-Creマウス(近位尿細管特異的sglt2(Na^+-glucose cotransporter 2)promoterでCre enzymeを発現ずるTGマウス)の交配で近位尿細管特異的rtTA/GFP蛋白発現マウスの系統を樹立し、蛍光顕微鏡でマウス腎近位尿細管特異的なGFP蛋白の発現を確認した。
2. rtTA/doxycycline誘導型(tet-on system)のAT1/AT2トランスジェニックマウスの作製
tet07プロモーター(doxycycline結合rtTA蛋白の結合により下流の蛋白発現が誘導される)のベクタープラスミドpBI3にマウスAT1およびAT2のcDNAを組み込み、tet-on systemが作動するtet07-AT1とtet07-AT2のTGコンストラクトを作製すべく、pBI3を開発者矛より供与され、現在作製中である
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