原発性高蓚酸尿症1型は肝臓細胞内のserine/pyruvate:alanine/glyoxylate ammotransferase(SPT/AGT)の酵素異常によって幼い時期に死に至る疾患であり、酵素法によるSPT/AGT活性の側定によって診断確定されるが、必須の酵素であるGlyoxylate reductase(GR)が発売中止になり、SPT/AGT活性の他の測定法の確立が求められている。本研究の目的は、抗serine dehydratase(SDH)抗体を用いることにより、GRを用いないSPT/AGT側定法を開発し、世界中て使用可能にすることである。 従来のSPT/AGT活性の測定は、L-serineから生じたOH-PyruvateにGRを反応させ測定を行う。我々はSPT/AGTがSerine/Glyoxylate aminotransferase(SGT)活性も併せ持つことを利用し、L-serineから生じたOH-PyruvateにLDHを反応させ測定を行う事を計画した。しかし、SDHはL-SerineをPyruvateに変化させ、それがLDHと反応するため、SGT活性側定の妨げとなる。そのため抗SDH抗体を用いることによりSDHを不活化し、SGT活性を利用したSPT/AGT測定を可能にする。初年度であるH19年度の計画はSDHを不活化する為の抗SDH抗体の適正量を決定する。方法は一定量の肝臓に抗SDH抗体を反応させた後、Protem G Sepharoseにて反応物質を除去しSDHを不括化する。SDHを不活化した後のSDH活性は2.94μmol/min/g liverから0.45μmol/min/g liverまで低下し、SGT店性測定の問題にならない程度となった。H20年度はこの結果を用いて日本人のSPT/AGT活性の標準値を測定する予定である。
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