| 研究概要 |
尿路結石は多段階で形成され,オステオポンチンは結石形成時に腎尿細管で発現し,結石形成に重要であると考えられている。オステオポンチンはアミノ酸配列から,情報伝達のリガンドとして作用するRGD部位,カルシウム結合部位などの機能部位が知られ,それぞれが蛋白の機能に重要な役割を担っていると考えられる。本研究では尿路結石形成の主要遺伝子であるOPNの機能をRGD配列,カルシウム結合部位など各機能部位を欠失させた,dominant negativeトランスジェニックマウスを作成し,各部位の機能解析を行っていく。
OPN-KOマウスと正常OPN,RGD配列をRGEに変換したOPN,カルシウム結合部位を欠損したOPNを発現するトランスジェニックマウスを作成した。Wild typeマウスでは蓚酸刺激や前駆物質投与により,尿細管細胞でOPNが強く発現するため,変異OPNトランスジェニックマウスでは,導入した変異OPNの機能を解析することが困難である。このため,OPN-KOマウスと変異OPNトランスジェニックマウスを交配し,wild type由来のOPN発現が消失し,トランスジェニックマウス由来のそれぞれのOPNを発現する遺伝子組み換えマウスを作成した。出産後のマウスの尾より抽出したDNAをOPN-KOマウスに対するPCRと挿入遺伝子に対するPCRで遺伝子型を決定して繁殖を行った。尿路結石モデルマウスとしてglyoxalate 100mg/Kgを腹腔内投与し,腎臓を摘出した。摘出した腎臓の結石形成を調べるとともに,透過型電子顕微鏡(TEM)で観察した。RGEトランスジェニックマウスでは結石数が少なく,カルシウム結合部位欠失トランスジェニックマウスでは,結石が成長しない傾向にあった。個体数を増やし,経日的にさらに詳細に検討することで,それぞれの部位の機能を明らかにしていく予定である。
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