| 研究概要 |
Differentiation-inducing factor(DIF)は,細胞性粘菌Dictyostelium discoideumが分泌する物質で粘菌の柄細胞への分化を誘導する物質として単離された.DIFは粘菌細胞以外にも哺乳類細胞で分化誘導作用や増殖抑制作用を示すが,DIFのターゲット分子(結合タンパクや受容体)は全く不明であった.2004年に,われわれは細胞内のセカンドメッセンジャーであるcAMP等を分解するphosphodiesterase(PDE)1がDIFのターゲット分子であることを世界で初めて発見した.そこで本研究ではsiRNAを応用しPDE1が増殖に関係するかどうかを確認することを着想した.
各悪性腫瘍細胞でのPDE1アイソザイム(PDE1A, PDE1B, PDE1C)の発現をRT-PCRで検討した.多くの細胞でPDE1AとPDE1Cは発現していたが,PDE1Bはほとんど発現していなかった.SK-Hep-1細胞等にpositive controlとしてGAPDH等のsiRNAをLipofectamine RNAiMAXにて導入し,Real-Time PCRでGAPDHmRNAの発現量を定量した.そして,抑制率が70%以上である導入条件を確定した。そこで,発現が確認できているPDE1AとPDE1CのsiRNAを上記の条件で導入し,それぞれのアイソザイムの抑制率が70%以であることを確認した.この条件で細胞増殖試験を行ったが,PDE1AとPDE1Cでは増殖には変化が認められなかった
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