| 研究課題/領域番号 |
19H00947
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| 研究機関 | 東京大学 |
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研究代表者 |
潮 秀樹 東京大学, 大学院農学生命科学研究科(農学部), 教授 (50251682)
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| 研究分担者 |
細谷 孝充 東京医科歯科大学, 生体材料工学研究所, 教授 (60273124)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2023-03-31
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| キーワード | 褐藻 / デオキシガラクトース / 抗肥満 |
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| 研究実績の概要 |
DeOGalがマウス脂肪細胞のエネルギー代謝に及ぼす影響を網羅的に解析した．マウス3T3L1脂肪細胞にDeOGalを投与し，12，24，48時間後にタンパク質脱リン酸化阻害剤を含むRipaバッファーにてタンパク質を回収し，NanoLC-MS/MSによるProtein Pilotにて変動タンパク質群を同定した． 特に脂質代謝に注目するため，その代謝産物の解析に有利なGC-MS/MSを用いたメタボローム解析を行った．水を加えて2層分配して水層とクロロホルム層を回収する．回収試料を乾固して自動誘導体化装置を装着したGC-MS/MS（現有）分析に付した．水層についてはメトキシム化後トリメチルシリル化を，クロロホルム層についてはけん化後メチルエステル化を行った．得られたメタボロームデータを元に，DeOGalがエネルギー代謝，特に脂質代謝に及ぼす影響を把握するとともに，その代謝経路と関与し得る酵素群を明らかにした．トリプシン消化した試料を酸化チタンチップでアフィニティ濃縮し，NanoLC-MS/MS，Protein Pilot解析にて変動したリン酸化タンパク質群を同定した．候補経路については，SDS-PAGEおよび特異的抗体によるウェスタンブロッティング解析によってその経路を確認した．
さらに，候補として導き出された情報伝達経路において，細胞内，細胞間による情報伝達の可能性についても検討を開始した．情報伝達経路によって分泌されるサイトカインやエイコサノイド類などを，既報の知見や3)のメタボローム解析から推定し，脂肪細胞におけるトランスクリプトーム解析を行った．以上の結果から，DeOGalは脂肪細胞における脂肪酸合成を抑制し，ミトコンドリアの異化活性を促進することで，脂肪酸の分解を誘導することが明らかとなった．
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
当初予定していたように，DeOGalが脂肪細胞における脂肪酸合成を抑制し，ミトコンドリアの異化活性を促進することで，脂肪酸の分解を誘導することが明らかとすることができた．
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| 今後の研究の推進方策 |
DeOGalが糖鎖付加に影響を及ぼす可能性もある．そこで，DeOGal投与後の培養液あるいはマウス血中からアディポネクチンを単離し，トリプシン消化後，NanoLC-MS/MSにて解析することにより，LysおよびProの水酸化とo-グリコシル化の進行と糖鎖配列を解析する．これによって， DeOGalによる糖鎖付加や配列への影響がアディポネクチンの多量体化を誘導する可能性について判断する．最終年度には，以上の解析結果を包括的に考察することによってDeOGalの内臓脂肪蓄積抑制効果の作用機序の全容解明につなげる．
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