| 研究課題/領域番号 |
19H02949
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| 研究機関 | 宮崎大学 |
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研究代表者 |
本勝 千歳 宮崎大学, 農学部, 准教授 (30381057)
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| 研究分担者 |
稲葉 丈人 宮崎大学, 農学部, 准教授 (00400185)
牛島 幸一郎 岡山大学, 環境生命科学学域, 准教授 (20379720)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2023-03-31
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| キーワード | 果樹 / カンキツ / 自家不和合性 / S-RNase |
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| 研究実績の概要 |
昨年度までに’井原日向’およびHYSCについては，ヒュウガナツがもつS-RNaseの一つであるS15-RNaseの発現が低下していることが自家和合化の原因であることが明らかになっている．本年度は自家不和合性ヒュウガナツと，その自家和合化した突然変異体である’井原日向’およびHYSCの合計3系統を用いてDNAseqを行った．DNAseqデータから，各系統のS15-RNaseの上流領域約4kbの配列を取得した．これらを比較したが，3系統の間で差異は確認されず，’井原日向’およびHYSCのS15-RNaseの発現低下は，trans作用因子の変異によって引き起こされた可能性が考えられた．
ヒュウガナツでは花粉より抽出したRNAを用いて，PacBioシステムによるIso-seq解析を行い，ロングリード配列を得ている．この配列に対するアノテーション付けを行い，F-boxタンパク質をコードするとアノテーション付けされた配列を抽出し，クレメンティンから得たF-Boxタンパク質遺伝子と合わせて系統樹解析を行ったところ，クレメンティン自家不和合性遺伝子座に存在するF-boxタンパク質と近縁な配列がヒュウガナツからも獲得された．
ヒュウガナツS15-RNaseの組換えタンパク質について，今年度はコドン最適化を実施した人工遺伝子を合成し，これを用いて組換えタンパク質を作製した．まず，作製した組換えタンパク質はヒュウガナツ花柱より抽出したRNAを分解する活性を持つことを確認した．また，このタンパク質がin vitroにおけるヒュウガナツの花粉管伸長阻害効果を持つことが確認された．
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| 現在までの達成度 (段落) |
令和4年度が最終年度であるため、記入しない。
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| 今後の研究の推進方策 |
令和4年度が最終年度であるため、記入しない。
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