研究課題
バベシアのマダニ体内発育ステージに特異的な細胞表在性蛋白質を網羅的に検出し、伝搬阻止ワクチン（TBV）候補抗原を探索した。【材料と方法】Babesia ovata（三宅株）赤血球内発育ステージ（Blood stage）をin vitro誘導法（PubMed ID: 1549158）によりマダニ体内発育ステージ（Tick stage）へと誘導し、RNA-sequence法（RNA-seq.）を用いてTick stage分子の探索を行った。特徴的な形態が観察され、またRT-PCR法でTick stage遺伝子の発現が確認出来た分画をパーコール密度勾配遠心法で濃縮した。得られた原虫からRNAを抽出し、RNA-seq.に供した。次世代シークエンシング（NGS)でデータを取得し、同時に実施したBlood stage RNA-seq.データとの間で比較解析を行った。【結果】TBV標的に適した細胞外発育ステージに相当する、誘導後6時間のTick stage原虫をRNA-seq.に用いて、分画濃縮法にて、ウシ赤血球が除かれたTick stage原虫分画を精製し、RNA-seq.に供した。Tick stage誘導後6時間では核を１つまたは２つ有し、短い突起を持つray bodyと呼ばれる特徴的な形態が確認された。NGS RNA-seq.データをBlood stage/Tick stage間で比較解析したところ、Blood stageよりも Tick stageで発現量が2倍以上大きい遺伝子は413個あり、特にTick stageにおいて十分な転写産物発現量があると考えられる遺伝子は253個あった。これら遺伝子群から、TBVの候補となる表在性蛋白質遺伝子の同定を行った。結果、Tick stageでの発現量上位50遺伝子中に、原虫の細胞表面に局在していると推定されたタンパク質をコードする14遺伝子を同定した。【結論】原虫の細胞表面に局在していると推定されたタンパク質をコードする遺伝子14個の内、マラリア原虫において、そのオルソログが生存に重要であると考えられている遺伝子（TBV候補抗原遺伝子）として、以下の4つが見いだされた；BOVATA_007670、BOVATA_024940、BOVATA_036750及びBOVATA_038700。
令和3年度が最終年度であるため、記入しない。
すべて 2022 その他
すべて 国際共同研究 (2件) 雑誌論文 (2件) (うち国際共著 2件、 査読あり 2件、 オープンアクセス 2件) 備考 (2件)
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Pathogens
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https://www.obihiro.ac.jp/facility/protozoa/
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