| 研究課題/領域番号 |
19H03169
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| 研究機関 | 東京薬科大学 |
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研究代表者 |
三島 正規 東京薬科大学, 薬学部, 教授 (70346310)
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| 研究分担者 |
坂本 泰一 千葉工業大学, 先進工学部, 教授 (40383369)
田岡 万悟 東京都立大学, 理学研究科, 准教授 (60271160)
藤原 俊伸 近畿大学, 薬学部, 教授 (80362804)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | 遺伝子量補償 / SHARP / Xist / NMR |
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| 研究実績の概要 |
長鎖ノンコーディングRNAの一つであるXistは、染色体レベルでの転写を抑制する。このグローバルな転写抑制の分子レベルでの理解を目指し、XistとSHARPとの複合体の立体構造解析を行い、遺伝子量補償における鍵となる分子間相互作用の構造基盤の確立に取り組んでいる。構造解析の手法としては、多次元NMR、X線結晶構造解析を用いている。またリボプロテオミクス（免疫沈降と質量分析）による細胞内での結合部位の解析、他の因子との関連の解析も行う。
今年度、多次元NMR法によってNMR解析のための安定同位体標識タンパク質、安定同位体標識RNAの調製を行った。RRM23部分に関しては、良好なNMRスペクトルが得られており、NMR信号の帰属を完了しているので、種々の化学合成したRNAを用いてSHARP/Xist複合体に対して、スピンラベル導入による常磁性緩和効果からの長距離情報から得られるドメイン配向情報によって立体構造解析を進めた。並行して、XistのタンデムA-repeatのNMR構造解析も進めた。タンデムリピートでは、RNA-repeat間のダイナミクスによりRNA由来の信号が消失する、あるいは信号の激しい重複を起こす等の困難さが想定されるたが、複合体の解析に先立ち、RNA側を同位体標識し、RNA単体でのスペクトルの解析をすすめた。今年度新たに作成した安定同位体標識Xist（RNA）のNMR解析からも、Xistの物性に関する有用な情報が得られ、この情報をもとに今後のRNAのデザインについて、二量体化を防ぐ方針の検討を行った。また、リボプロテオミクスにより最適な結合RNA配列の同定を並行して行うため、Xistに対する解析システムの構築を行った。
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| 現在までの達成度 (段落) |
令和3年度が最終年度であるため、記入しない。
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| 今後の研究の推進方策 |
令和3年度が最終年度であるため、記入しない。
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