研究課題/領域番号 |
19H03185
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研究機関 | 関西学院大学 |
研究代表者 |
沖米田 司 関西学院大学, 理工学部, 教授 (90398248)
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研究分担者 |
中村 照也 熊本大学, 大学院先導機構, 准教授 (40433015)
高橋 宏隆 愛媛大学, プロテオサイエンスセンター, 講師 (70432804)
石黒 洋 名古屋大学, 総合保健体育科学センター, 教授 (90303651)
福田 亮介 関西学院大学, 理工学部, 助教 (90825308)
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研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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キーワード | ユビキチンリガーゼ / タンパク質品質管理 / CFTR |
研究実績の概要 |
1. QC 関連E3 リガーゼの X 線結晶構造解析:QC 関連 E3 リガーゼ RNF5 delta TM, RNF185 delta TM の結晶化を試みたが,現在の所,結晶化に成功していない.天然変性領域を欠失させた新しい RNF5, RNF185 発現コンストラクトを構築したため,再度,結晶化を試みる. 2. QC 関連DUBスクリーニング:AlphaScreen により,CFTR NBD1 に結合する DUB を見出した.これらの DUB と CFTR NBD1 の結合は構造依存的であった.培養細胞を用いた過剰発現実験において,CFTR 変異体の発現や細胞内安定性を制御するDUB を見出した.網羅的解析により,QC 関連 E3 リガーゼと結合し,その細胞内発現量を制御する DUB 分子を見出した. 3. QC 関連E3 リガーゼ KO 細胞における CFTR Ub コード解析:Ub ELISA 法により,各種 E3 KO 細胞での CFTR 変異体の K48-Ub, K63-Ub 化への影響評価を行なった結果,E3リガーゼによる CFTR Ub 化制御に Ub 鎖特異性は見られなかった. 4. CFマウスにおけるCFTR活性評価法の確立:CFマウス単離膵管において,CFTR 改善薬が fluid secretion を増加させた.従って,本手法でCFマウス単離膵管での CFTR 活性を評価可能であると考えられた.生マウスにおける鼻粘膜電位測定法 (NPD) による CFTR 活性評価法は確立できていない. 5. CF-HBE CFTR 活性に対する E3 KD の影響解析:CFTR 関連 E3 KD により,CF-HBE での delta F508 CFTR チャネル活性の改善が見られた.現在,CFTR 関連 E3 の KD 効率が低いため,今後,transfection 方法の改良を行う.
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現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
CFTR 変異体と QC 関連 DUB を用いた網羅的解析から,QC 関連 DUB 候補を同定することに成功した.また,一部の QC 関連 E3 の作用機序が明らかになりつつあり,今年度中に論文投稿の予定である.
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今後の研究の推進方策 |
1. QC 関連 DUB の作用機序解析を進める.同定した E3-DUB 複合体が生成する Ubコードを解析する. 2. RNF5, RNF185 について X 線結晶構造解析を進めるが,問題があれば NMR 解析も行う. 3. マウスにおける CFTR 評価法は,単離膵管モデルだけではなく,生マウスにおける鼻粘膜電位測定法確立も進める.
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