| 研究課題/領域番号 |
19H03275
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| 研究機関 | 琉球大学 |
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研究代表者 |
松浦 優 琉球大学, 熱帯生物圏研究センター, 助教 (80723824)
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| 研究分担者 |
二橋 美瑞子 (長内美瑞子) 茨城大学, 理工学研究科(理学野), 准教授 (00422402)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2023-03-31
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| キーワード | 細胞内共生 / 共生細菌 / 菌細胞 / ナガカメムシ / 自然免疫系 / RNAi / ゲノム |
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| 研究実績の概要 |
本研究では、細胞内共生を派生的に獲得したヒメナガカメムシとその共生細菌を主な対象に自然免疫系の遺伝子群の機能解析や細胞培養実験系を通して細胞内共生の包括的理解を目指している。本年度は遺伝子の機能解析を中心に進めた。ヒメナガカメムシ由来cDNAあるいは長鎖合成オリゴヌクレオチドを元に、それぞれ20、30種のdsRNAを合成した。それらを150 ng/ulの濃度で若い雌成虫に注射して、母性RNAiを誘導し、卵の観察と固定、共生細菌の定量を行った。十分な核酸量確保のために10個の卵を1サンプルとして抽出した。結果、３つの遺伝子処理区において、多数の成虫致死や極端な胚発生異常がみられたため、それらの遺伝子配列を検討対象から除外した。既に機能が判明しているUbxと他２つの処理区において菌細胞形成の異常が見られた。これらの２遺伝子について、追加で個別にRNAi処理を実施して、多数の卵を観察、固定した。さらに、RNAiによる菌細胞喪失に伴う共生細菌の減少量の検出が可能か、定量的PCRを実施したところ、Ubx-RNAiにより共生細菌コピー数が2から3割減少したが、値が大きくばらついたため、RNAi後の発生段階がずれやすい卵ではなく孵化直後の個体を用いて再実験を行う必要がある。また、オリゴヌクレオチド由来のRNA合成は実験操作を簡略化コスト減に成功したがRNAi効果の早期減衰が見られたため、重要な処理区ではdsRNAの配列を長くして再実験した。当初の予定年度内および繰越年度においても感染症の影響を大きく受け、実験と観察の中断が度々生じて、ベンチワークが遂行不能となったため、細胞内共生細菌Lariskellaのゲノム解析、ナガカメムシ類のミトコンドリアゲノムの多型解析、沖縄産害虫の腸内細菌多様性およびゲノム解析、昆虫共生菌・寄生菌類のゲノム解析などリモート環境で実施可能な研究を進めた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
感染症の拡大および代表者自身の感染と後遺症発症により予定していた実験の中断が長期間生じたため、目標としていた量の実験や観察処理区数、観察結果をまとめるまでには到っていない。多くの実験処理区の観察および解析が現在も進行中である。
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| 今後の研究の推進方策 |
これまでにRNAi処理して固定した卵の観察を迅速に進め、論文発表のための表現型データをまとめる。立ち上げと維持が実現していない培養実験系についても次年度の早い段階で実験処理と評価を行い、将来的な新規実験系確立のための基礎データとしてまとめる。
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