| 研究実績の概要 |
昨年度に引き続きTn-Seqスクリーニングにより得られた、同一のシグナル伝達経路に関わると考えられる2つの候補遺伝子(仮にxとyとする)について解析を行った。遺伝子x, yは細菌内でのシグナル伝達に関わることが予想されたため、RNA-Seqによる標的遺伝子の同定を試み、レジオネラが感染能を獲得する増殖休止期において、遺伝子x, yの欠失により強く発現が減弱する複数の標的候補遺伝子を昨年度までに得ることができた。本年度は、まずRT-PCR法による追試により、RNA-Seqの結果を検証することができた。さらにRNA-Seqの結果に基づきパスウエイ解析を行ったところ、x,yの欠失変異株では、レジオネラ病原性に必須なIV型分泌系の基質である、エフェクタータンパク質群の３割強にあたるものの発現が変化していることを見出した。またこの現象に関与すると考えられる、シグナルを受ける側の候補遺伝子を複数見出すことができた。この現象の生化学的証明を目指して、x, y遺伝子産物であるタンパク質の大量発現・精製を行ったところ、いずれのタンパク質精製においても性質の異なる軽微な困難があったものの、結果として双方とも精製することに成功した。今後、シグナルを受ける側のタンパク質を精製し生化学的に解析を行うとともに、感染細胞内での遺伝子発現の検討などを行い、全ての結果を統合することにより、遺伝子x, yの作用機序を明らかにしていきたい。
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