研究課題
「胆道系の恒常性維持は、胆汁中のEVに含まれる分子を介した伝達システムを用いた胆道を構成する細胞同士のクロストークにより成立されているのではないか？」という中心仮説を立て、それを示すために「①肝細胞由来のEVと胆管上皮細胞由来のEVは異なる成分を持つ、②それぞれのEV中の分子は下流の胆管上皮細胞に対して異なる細胞生物学的意味を持つ、③胆汁うっ滞性肝疾患ではEVに含まれる因子がさらに周囲の胆管上皮細胞の病態形成に影響する」という仮説を立てた。本年度研究では胆汁中EVの胆管上皮細胞の管腔側及び基底膜側に対する作用の検討もおこなった。上記NTA法で確認した分離EVを、培養ヒト及びマウス胆管上皮細胞の微絨毛を有する管腔側より添加し、細胞の変化を生理学的（胆汁分泌能、重炭酸濃度）、免疫学的（細胞内各種サイトカインmRNAの変化、管腔側培養上清中のフロービーズアレイアッセイ）、線維化能（MMPやコラーゲン産生能）について検討する。さらにEV添加された胆管上皮細胞から二次的に新たに放出されるEVを基底側腔及び管腔側よりそれぞれ回収し、２次的な細胞間クロストークの検討を行なった。R3年度は胆汁うっ滞性肝疾患ではEVに含まれる因子がさらに周囲の胆管上皮細胞の病態形成に影響するかを検討するためのin vitroおよびin vivo実験系を行なった。ⅰ）まず上記①で開発した手法で得られた胆汁うっ滞性肝疾患マウスモデル系（インターフェロン－γ及び胆汁酸添加実験）から分離したEVを用いて、それぞれをin vitroの極性を保った培養系の管腔側に添加実験を行い，免疫学的パラメーター（サイトカイン産生能）、及び線維化（コラーゲン産生、MMP産生能）を測定した。その結果基底膜側にはより免疫細胞の遊走能に促進的に働く分子がEV中に含まれていることを見出した。
令和3年度が最終年度であるため、記入しない。
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Sci Rep
巻: 11 ページ: 1195
10.1038/s41598-021-81023-y
