| 研究課題/領域番号 |
19H03892
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| 研究機関 | 川崎医科大学 |
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研究代表者 |
西村 泰光 川崎医科大学, 医学部, 准教授 (90360271)
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| 研究分担者 |
武井 直子 川崎医科大学, 医学部, 講師 (00509276)
大槻 剛巳 川崎医科大学, 医学部, 教授 (40160551)
李 順姫 川崎医科大学, 医学部, 助教 (70414026)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | 石綿 / 中皮腫 / 免疫 / トランスクリプトーム |
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| 研究実績の概要 |
2019年度までに、複数種の石綿曝露下で長期間培養したヒトCD8+T細胞株EBT-8の全転写産物の解析(トランスクリプトーム解析)を実施し、CA, JAWE, CRの何れの石綿曝露もIFN-γ mRNA量の低下を引き起こし、4倍以上の変動を示す転写物はIFN-γを含み5つ有ることが分かった。そこで、解析内容の確認と分析を進め、また悪性中皮腫患者末梢血の免疫機能解析を実施し、石綿曝露および悪性中皮腫が関わる免疫機能変容の解析を進めた。長期間石綿曝露下培養後のEBT-8細胞株試料を用いてqRT-PCRにより遺伝子発現変動を確認した。トランスクリプトーム解析結果と一致し、5つの遺伝子発現変動は石綿曝露に共通することが確認された。さらに、5つの遺伝子発現量変動についてIFN-γと他の相関性を調べたところ、既知遺伝子の１つと２つの未知転写物はCA, JAWE, CR曝露により発現量が低下し、いずれもIFN-γ発現量と正相関し、他方の既知遺伝子はCA, JAWE, CR曝露により発現量が増加し、IFN-γ発現量と逆相関性を示した。また2倍以上の差を示すものは78あったが、CR曝露亜株で転写産物量変動を示す遺伝子にはCA曝露亜株の転写産物量と負に相関するものが多数存在することが分かった。以上の結果は、石綿曝露による免疫抑制作用に関わる共通の遺伝子群の存在を示唆する一方、石綿種での異なる免疫機能影響を示唆する。悪性中皮腫患者の末梢血よりPBMCを調整し一部はフローサイトメトリーを用いて細胞表面分子発現量を測定し、残りからRT-qPCRにより各細胞集団のmRNA発現レベルを測定した。その結果、ニボルマブ投与による悪性中皮腫の治療奏効と関わるNK細胞およびT細胞における遺伝子発現変動の特徴を捉えた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
計画通りに、トランスクリプトーム解析結果の更なる分析と、細胞培養実験および分子生物学的分析によって、石綿曝露による免疫抑制作用の核心に近づくことができた。また、悪性中皮腫患者の末梢血検体の収集および分子免疫学的分析も計画どおりすすんでいる。従って、本研究課題の当初の計画にそって研究は概ね順調に進展していると判断できる。
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| 今後の研究の推進方策 |
今後、臨床検体の更なる収集および分析を進め例数を増やす。また、保存した患者由来細胞の培養上清を検体とした免疫学的分析を予定する。更には、蓄積されたデータの多変量解析を進める。それらより、石綿曝露による免疫抑制作用および悪性中皮腫患者の予後に関わる免疫学的特徴の実態解明を行う。
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