| 研究課題/領域番号 |
19J20553
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| 研究機関 | 九州大学 |
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研究代表者 |
内藤 優希 九州大学, 医学系学府, 特別研究員(DC1)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-25 – 2022-03-31
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| キーワード | 始原生殖細胞 / 細胞系譜の分岐 / シグナル |
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| 研究実績の概要 |
始原生殖細胞 (Primordial Germ Cells ; PGCs)形成過程において、BMPおよびWNTシグナルは必要不可欠である。これまでの研究において、これら 2つのシグナルの下流で機能する可能性のあるOvol遺伝子群に着目し、これらの遺伝子群はPGCsへの分岐を促進する因子であり、Ovol2が主にこの分岐に機能することを解明した。
このOvol2によるPGCsへの分岐の促進はBMPシグナル依存的であり、Ovol2を欠損させたPGCsでは著しくWNTシグナルの活性が低下していた。
これらの結果をふまえ、本研究ではBMPおよびWNTシグナルの細胞内シグナル分子であるSMAD1/5およびβ-CATENINとOVOL2が相互作用することで、PGCsの分岐においてシグナル入力や特異性を調整している可能性を検証した。
OVOL2と、SMAD１およびβ-CATENINとの相互作用の有無を共免疫沈降により検証をおこなったが、結合は認められなかった。タンパク質同士の結合を検出する共免疫沈降は、必要細胞数が非常に多く、検出感度にも限界があることを想定し、より高感度でOVOL2のターゲット領域が検出可能であるクロマチン免疫沈降シーケンスをおこなった。
PGCsにおいてOVOL2のクロマチン免疫沈降シーケンスをおこなった結果、インプットサンプルと比較して有意にOVOL2が結合している領域を同定することに成功した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
OVOL2と、SMAD1およびβ-CATENINの相互作用の有無を共免疫沈降により検証したが、結合は認められなかった。共免疫沈降によるタンパク質同士の結合の検出は、検出感度に限界があることから、より高感度、高精度に転写因子の結合領域をゲノムワイドに同定できるクロマチン免疫沈降シーケンスをもちいて、PGCsにおけるOVOL2の結合領域の同定を試みた。解析により、OVOL2が結合するゲノム領域を同定した。
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| 今後の研究の推進方策 |
クロマチン免疫沈降シーケンスにより同定したOVOL2の結合領域のなかで、実際にOVOL2が転写活性を制御している領域を検証するため、ルシフェラーゼアッセイをおこなう。ルシフェラーゼレポーターベクターを一過的に発現させた細胞において、OVOL2依存的に転写活性が変化するかどうかを検証する。またPGCs特異的にOVOL2による転写活性制御が機能する可能性を考慮し、誘導初期のPGCsにおいてルシフェラーゼアッセイがおこなえるよう条件検討をおこなう。
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