2023 年度研究成果報告書

正電荷に基づくタンパク複合体電気泳動Reverse Native PAGEの開発

研究課題

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研究課題/領域番号	19K05704
研究種目	基盤研究(C)
配分区分	基金
応募区分	一般
審査区分	小区分37010:生体関連化学
研究機関	安田女子大学
研究代表者	平野真安田女子大学, 薬学部, 講師 (60514172)
研究期間 (年度)	2019-04-01 – 2024-03-31
キーワード	電気泳動 / 陽イオン
研究成果の概要	本研究では、正電荷を含むタンパク質複合体を電気泳動により分離するため、新たな電気泳動法の開発を行った。タンパク質複合体に正電荷を付与するチャージシフト分子として、パラローズアニリンを出発物質に、その誘導体を合成した。これらが中性の溶液で正に帯電することを示した。これらを用いて、種々の組織由来のタンパク質複合体に正電荷を付与し、電極を逆転させ、電気泳動することができた。また、糖鎖認識分子であるレクチンと糖タンパク質の複合体のような比較的弱い相互作用により形成された複合体にも適用できた。
自由記述の分野	生化学
研究成果の学術的意義や社会的意義	タンパク質複合体の分離にはゲル濾過も用いられるが、電気泳動の方が分離能は圧倒的に高い。また、複合体の大きさに応じて適切なゲル濾過担体を選択する必要があるが、電気泳動では濃度勾配ゲルを用意すれば幅広い大きさの複合体に対応できる。電気泳動によるタンパク質複合体の分離にはNative PAGEやBlue Native PAGEなどが適用されている。しかし、いずれもタンパク質複合体の負電荷に基づき分離する。本研究にて開発したRN-PAGEでは正電荷に基づき分離する。本法により、これまで困難であった陽イオンを含むタンパク質複合体の分離が可能となり、これまでの負電荷に基づく分離と相補的な手法となり得る。