| 研究課題/領域番号 |
19K05825
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| 研究機関 | 信州大学 |
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研究代表者 |
高梨 功次郎 信州大学, 学術研究院理学系, 准教授 (10632119)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | ムラサキ / シコニン / アルカニン / アシル基転移酵素 |
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| 研究実績の概要 |
前年度までにシコニンもしくはアルカニンにそれぞれ特異的にアシル基を付与するBAHDアシル基転移酵素を2分子種（LeSAT1、LeAAT1）見出し、至適pHや基質親和性などの諸特性を調べた。RNA-seqデータの再解析からさらに1分子種ずつシコニンもしくはアルカニンにそれぞれ特異的にアシル基を付与するBAHDアシル基転移酵素が見出されたので（LeSAT2、LeAAT2）、これらの酵素諸特性も調べた。
ムラサキ培養細胞を用いてフィーディング実験を行った先行研究において、シコニン／アルカニンのアシル基転移酵素は、デオキシシコニンに水酸基を導入してシコニン／アルカニンを生産する酵素と複合体を形成することが示唆されている。このデオキシシコニン水酸化酵素はまだ同定されていない。そこで、シコニン生産時に発現が上昇するシトクロムP450遺伝子を探索したところ3分子種見出された。これらとLeSATs、もしくはLeAATsとの相互作用の有無をYeast Two-Hybrid法にて調べたところ、1つの組み合わせにおいて相互作用が確認できた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
これまでに計4分子種のシコニン生合成経路に関与するBAHDアシル基転移酵素を見出し、それらの酵素特性を明らかにした。さらにデオキシシコニンへの水酸基導入反応を行う酵素の候補もYeast Two-Hybrid法で見出しており、研究開始時には未解明であったシコニン生合成経路の後半部分が順調に明らかになってきている。
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| 今後の研究の推進方策 |
Yeast Two-Hybrid法で相互作用が確認できた組み合わせについて、共免疫沈降法を用いて相互作用の有無を確認する。相互作用が確認できれば、相互作用することによる酵素の諸特性の変化や細胞内局在を調べる。
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