| 研究課題/領域番号 |
19K05845
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| 研究機関 | 鳥取大学 |
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研究代表者 |
一柳 剛 鳥取大学, 農学部, 教授 (00302240)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | リポ多糖 / 糖脂質 / ヒト抗体 / Kdo / Heptose / LPS / 糖鎖合成 / ライブラリ |
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| 研究実績の概要 |
本研究では，グラム陰性菌が産生する複合糖脂質LPS/LOSの構造普遍領域糖鎖(コア糖鎖)の精密化学合成の手法を基盤に，KdoおよびL-グリセローD-マンノヘプトース(Hep)からなる糖鎖ライブラリを作成し，殺菌性抗体産生に必要な最小構造を解明しワクチン開発に向けた基礎構築を目指している。このうち①連続分岐構造を有するコアオリゴ糖鎖の化学合成法の確立，②コア糖鎖-磁気粒子コンジュゲートを使用したヒト抗体の選抜③選抜したヒト抗体の殺菌性の検証とエピトープの解析に焦点を当てて取り組むことにしている。このうち、本年度は①②についてに取り組み、以下のことを達成した。
①-a. 3,4-分岐構造を持つHep含有５糖糖鎖の合成を達成した。Hepの環水酸基の反応性を明らかにし、効率的合成経路を解明した。続いてKdoとの縮合により、連続分岐7糖合成に成功し、Neisseria属LOSのコア糖鎖合成を初めて達成した。
①-b. ナフチルメチル基を有するHepを新たに設計し、コア糖鎖合成に適応し、Haemophilus属、Enterobacter属、Pantoea属LPSの中性コア３糖合成に成功した。
②6種類の糖鎖からなる、コア糖鎖ー磁気糖鎖コンジュゲートを作成し、ヒトIgG, IgMからコア糖鎖認識抗体の選抜をした。選抜ヒトIgGは数種の天然LPSおよびサルモネラ属変異株(Re-LPS)を認識することを確認した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
計画時の３つの達成目標のうち、①の連続分岐構造を有するコアオリゴ糖鎖の化学合成法の確立について、Neisseria属LOSのコア糖鎖は達成できた。②コア糖鎖-磁気粒子コンジュゲートを使用したヒト抗体の選抜に取り組みでは、糖鎖-磁気粒子コンジュゲートの作成法、抗体選抜プロトコルの確立と再現性の確認ができた。当初計画では２年目での達成を予定していたため、おおむね順調と判断した。
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| 今後の研究の推進方策 |
２年目は、初年度達成した合成経路に従い、糖鎖ライブラリの充実にむけ、糖鎖合成のスケールアップを実施する。具体的にはNeisseria属LOSの部分コア糖鎖を中心に分岐３から7糖糖鎖をそれぞれ10mg単位での合成とその磁気粒子コンジュゲート作成を行うするために、2-4結合を有するKdo２糖の合成中間体の合成方法改善と効率化、Hep合成の効率化とスケールアップを実施する。
選抜したヒト抗体については、その殺菌能力を評価するためのプロトコル確立を実施する。評価には安全性を考慮し、まず病原性を持たない、もしくは病原性が低い血清感受性菌株での実施を検討する。
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