| 研究実績の概要 |
β-1,6グルカンの免疫賦活機能を評価するために、各種β-グルカンを用いて、マクロファージ様細胞（RAW264.7）を用いた細胞試験を行った。シイタケ抽出物（熱水抽出物またはアルカリ抽出物）、コンブ由来のラミナリン、シイタケ由来のレンチナン、イワタケ熱水抽出物、ゲンチオビオース（β-1,6グルカン2糖）、β-1,3グルカン３－５糖を用いて試験を行った。なお、酵素合成したβ-1,6グルカンについては収量が少なく繰り返しの試験に用いることが困難なため、上記の試験で方法を確立した上で試験に用いることとした。RAW264.7培養液に、終濃度: 100 μg / mLとなるように各種サンプルを添加し、４時間インキュベートした。細胞からRNAを抽出しcDNAを調製した後、リアルタイムPCRを用いてTNFαの発現量を分析した。その結果、イワタケ熱水抽出物において、TNFαが高発現する傾向が認められた。一般的な真菌類は細胞壁中にβ-1,6グルカンのみならずβ-1,3グルカンなどの多糖類も含む。一方でイワタケの細胞壁はβ-1,6グルカンのみが主に含まれていることが知られている。実際にイワタケ熱水抽出物にβ-1,6グルカンが含まれることをNMR解析で確認した。さらに純度の高いβ-1,6グルカンを調製するため、熱水抽出物に対して様々な処理を行ったところ、アルカリ洗浄が不純物の除去に有効であることがわかった。しかしながら、得られたサンプルを上記のRAW264.7細胞試験に供したところ、TNFα発現が安定しなかった。また、水への溶解性が低下しゲル化しやすい傾向が認められ、カラムでの分離や各種試験に用いることも困難であった。そこで、β-1,6グルカナーゼで処理し、ある程度低分子化することで、扱いやすい試料になるよう検討を進めている。
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| 今後の研究の推進方策 |
イワタケ熱水抽出物、ゲンチオビオース（β-1,6グルカン2糖）、β-1,3グルカン３－５糖を用いて、RAW264.7細胞試験に供しRNAシークエンスを行う。特徴的な遺伝子を探索し、β-1,6グルカン受容体候補遺伝子、およびβ-1,6グルカンによって発現量が上昇する遺伝子群を明らかにする。一方で、アルカリ処理により構造や成分がどのように変化するのか調べることで、β-1,6グルカンおよびイワタケ抽出物の機能特性も明らかにしたいと考えている。
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