研究課題
最終年度に以下の成果が得られた。【１．細胞抽出液によるin vitro変換実験】渦鞭毛藻粗抽出液の硫安分画各画分に化学合成した生合成中間体及び安定同位体標識前駆体を添加して、一つの画分で予想される反応が進行したことを高分解能LC-MSで確認した。【２．生合成酵素SxtGの細胞内局在】渦鞭毛藻のSxtGを大腸菌に異種発現して得たリコンビナントSxtGタンパク質とA. catenella（Group I)有毒、無毒株の粗抽出液のWestern blottingにより、抗SxtGペプチド抗体が同様な移動度のバンドを与えることを確認した。さらに昨年度作成したアフィニティカラムを用いて抗SxtG抗体を精製し、共焦点レーザー顕微鏡観察で良好なシグナルが得られることを確認した。抗SxtA抗体と抗SxtG抗体の多重免疫染色により、両抗体でのシグナルが一致したことから、SxtGもSxtAと同様に葉緑体に局在していることが示唆された。【３．STX類縁体の局在解析】GTX1/4特異的アプタマーがパラホルムアルデヒド固定したGTX1/4を認識することを確認した。抗STX抗体とGTX1/4特異的アプタマーでSTX類縁体の局在を調べたところ、両者のシグナルが異なる局在を示した。生合成酵素SxtAの局在とも異なることから、生合成あるいは蓄積のいずれかの過程で輸送がかかわっていることが明らかとなった。類縁体の構造によって生態学的役割が異なる可能性があるという仮説を提唱した。今後環境の変動に応じてどのように生合成酵素の量、局在及び活性が変動するかを調べることで、STX生合成制御機構の解明へと展開する。近年の温暖化や自然災害などによる地球環境変化が毒化にどのように影響するかについて予測するための基盤となる有用な知見が得られたため、将来的には各種要因の影響を複合的に予測可能となることが期待される。
すべて 2022 2021
すべて 雑誌論文 (2件) (うち査読あり 2件、 オープンアクセス 1件) 学会発表 (18件) (うち国際学会 3件、 招待講演 6件)
Marine Drugs
巻: 20 ページ: 166～166
10.3390/md20030166
Organic & Biomolecular Chemistry
巻: 19 ページ: 7894～7902
10.1039/d1ob01378e
