| 研究課題/領域番号 |
19K06491
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| 研究機関 | 愛媛大学 |
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研究代表者 |
冨川 千恵 愛媛大学, 理工学研究科(工学系), 講師 (60527696)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | small RNA / 翻訳 / アミノアシルtRNA合成酵素 |
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| 研究実績の概要 |
乳酸菌に存在するtRNA様のsmall RNAの機能を探るべく以下の実験を行いました。
（１）当該RNAに対する親和性タンパク質の同定→タンパク質質量分析結果により、複数の親和性タンパク質候補が得られました。これらタンパク質とsmall RNAとの親和性をゲルシフトアッセイを行ったところ親和性を確認することはできませんでしたが、該当タンパク質の既知機能から、別のタンパク質因子との関連性が示唆されました。それら因子を調製し、現在、small RNAとの関係性を明らかにするため解析をすすめているところです。
（２）乳酸菌GlyRSの解析→生化学解析が完了したことから、東京大学・富田耕造博士との共同研究でGlyRSのX線結晶構造解析に着手しました。乳酸菌tRNA様small RNAとGlyRSの複合体結晶化試料で微細な結晶を確認することができましたが、十分なX線回折データを得ることができませんでした。現在、さらに状態の良い結晶を得ようと試みているところです。
（３）乳酸菌IleRSの解析→２種乳酸菌IleRSに関して比較解析を行うため、IleRSのキメラ酵素および点変異酵素を調製しました。キメラ酵素のアミノアシル化活性測定で、基質認識に重要と思われるドメインを特定し、さたに、点変異酵素の反応測度論解析を行い基質認識に重要なアミノ酸残基を特定することができました。また、IleRSによる基質認識に関して、新たな知見を得ることができましたので、現在、論文にまとめているところです。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
アミノアシルtRNA合成酵素の解析が多方面で進んだこと、tRNAIle(UAU)様分子に関係すると考えられる因子の候補を複数あげることができたこと、現在2報の論文執筆に着手できていることから、「おおむね順調に進展している」と評価しました。
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| 今後の研究の推進方策 |
以下の研究を進めます。
（１）当該RNAに対する親和性タンパク質の同定→新たに見つかったタンパク質因子とsmall RNAとの関係性を明らかにするため解析をすすめます。
（２）乳酸菌GlyRSの解析→GlyRSの結晶化条件は特定できているので、より良質の結晶を準備しX線結晶構造解析を行います。
（３）乳酸菌IleRSの解析→論文にまとめます。
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