| 研究課題/領域番号 |
19K06675
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| 研究機関 | 信州大学 |
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研究代表者 |
友常 大八郎 信州大学, 学術研究院医学系, 助教 (80283802)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2023-03-31
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| キーワード | ポリコーム遺伝子 / 多能性幹細胞 / 未分化維持 |
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| 研究実績の概要 |
ES細胞やiPS細胞といった多能性幹細胞は、様々な細胞に分化する能力を持つため、再生医療において、その細胞供給源になると期待されている。しかし、多分化能を保持するためには、未だ分化してない未分化状態であり続ける必要があり、未分化状態が破綻すれば多能性が失われる。本計画では、自然に未分化性が破綻する状況を再現した実験系で見いだされた２つのエピジェネティック遺伝子（ポリコーム遺伝子群に属するMBTファミリー遺伝子）の機能について、特に、未分化性の破綻と正常な分化との違いに焦点をあてて解析している。
本年度は昨年度から引き続き、未分化状帯の破綻に際して発現が増加するMBTファミリー遺伝子（L3MBTL1とFMBT2）の機能解析を行った。これらの遺伝子をiPS細胞に導入して強制発現させると、未分化が破綻する条件でもある程度未分化性が維持されることが、さまざまな未分化マーカーの発現解析で分かった。さらに、CRISPR-Cas9 システムを用いてMBTファミリー遺伝子の発現をノックアウトしたiPS細胞を作成したところ、未分化の破綻が起きやすい傾向があること示された。これらのことは、L3MBTL1とFMBT2は他のポリコーム遺伝子と同様に未分化維持に関与しているが、その作用の仕方は未分化状態が破綻した時に、それを引き戻すように行われることを示唆してる。また、細胞培養下におけるノックアウトしたiPS細胞の特性などから、破綻の状況がさらに明確になった。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
MBTファミリー遺伝子をノックアウトしたiPS細胞を作成したが、その維持培養は予想以上に困難であった。そのため、解析のコントロールがしづらく、予定しているChiP解析が進んでいない。ただ、未分化状態が破綻する際の状況に対する理解はさらに深まった。
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| 今後の研究の推進方策 |
MBTファミリー遺伝子を強制発現した細胞をノックアウト細胞の代わりに用いるなどして、ChiP解析を進める。その際、ChiP-seq解析も行い、未分化状態とそれが破綻した際のL3MBTL1やFMBT2の標的遺伝子を同定する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
費用のかかる網羅的解析（次世代シークエンス）が次年度に先送りされたためであり、次年度にそれを行って使用する予定である。
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