| 研究課題/領域番号 |
19K06898
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| 研究機関 | 弘前大学 |
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研究代表者 |
長友 克広 弘前大学, 医学研究科, 助教 (30542568)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2023-03-31
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| キーワード | ドーパミン受容体 |
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| 研究実績の概要 |
申請者らは、これまでに報酬や運動制御に重要とされるドーパミンの受容体分布を成熟マウスの線条体、黒質網様部、皮質視覚野から急性単離したアストロサイトについて調べたところ、それぞれの領域で異なる受容体発現分布を示すことを報告した(Nagatomo et al, Font Neuroanat. 2017)。その後、線条体アストロサイトでは、細胞内シグナルが正反対のドーパミン受容体(DR)を単一細胞に発現している可能性が出てきたことから、本研究では、DRを発現する細胞が蛍光標識される遺伝子組換え(TG)マウス2系統を利用し、同一細胞に異なる受容体を発現する可能性およびその生理機能を検証することを目的としている。2017年論文投稿以前より感じていた「線条体ではGFAP陽性アストロサイトが黒質網様部に比べて少ない」という問題について、研究室配属の学生との実験を通して、GFAPを発現しているアストロサイトの脳内分布を知るに至った。現在までに実施してきた実験は、脳を酵素処理し、単一細胞にして、受容体発現を解析するものだったため、全体を俯瞰することの重要性を改めて知らされた。しかし、本研究主題であるところのドーパミン受容体を発現しているであろうGFAP(+)アストロサイトの線条体における局在を見事に示せたことに違いはない。現在、GFAP以外のアストロサイトマーカーを検討を進めると共に、急性単離細胞では極細プロセスの観察が難しいことから、初代培養に近い実験系を検討している。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
概要にも記載したが線条体におけるGFAP(+)アストロサイトの局在を予期せず知るに至ったことは研究の方向性を決める上で重要な結果となった。種々アストロサイトマーカーの検討結果から線条体アストロサイトは、黒質網様部と比較して、ポピュレーションとして少なく、また、おそらく線条体の解剖学的構造(洗浄対中を走行する軸索の束)にも少なくなる要因があるのではないかと推測している。急性単離細胞では極細プロセスを観察するのが難しいため、急性単離後に初代培養し、カバーガラス面へ定着伸長した極細プロセスを捉えられるか検討を始めた。
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| 今後の研究の推進方策 |
文献を紐解くと、線条体における神経細胞-アストロサイト比率は黒質網様部におけるその比率よりも、神経細胞が多く存在することが報告されており、実験を進める上では、ある程度の困難であろう考えている。アストロサイトマーカーと考えられている抗体による染色が、線条体アストロサイトを効率よくあぶり出せないのであれば、1つの方法として、sulforhodamine 101 (SR-101)が利用できる可能性がある。SR-101はアストロサイトに特異的に取り込まれる試薬であり、免疫染色において残存するのであれば、抗体染色よりも非常に有効な方法になり得るのではないかと考えている。当初の実験計画時点では、急性単離アストロサイトで種々薬理実験を実施するとしていたが、極細プロセスの観察が難しいことから、急性単離後に数日培養を行い、カバーガラス面に極細プロセスが定着伸長するかどうか検討し、薬理実験に供する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
実験方法の再検討が必要になり実験進度がやや遅れているため、次年度使用額が生じた。延長申請を行ったので、実験計画に支障のないように使用する。
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