| 研究課題/領域番号 |
19K07141
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| 研究機関 | 東京薬科大学 |
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研究代表者 |
一柳 幸生 東京薬科大学, 薬学部, 教授 (80218726)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2023-03-31
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| キーワード | ブルサトール / デオキシボウバルジン / RA-VII / フッ化アナログ / 細胞毒性 |
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| 研究実績の概要 |
本年度は、昨年度に引き続きアナログ合成の原料として用いるカッシノイド化合物のブルサトール類およびRA系ペプチド化合物の供給を行うとともに、RA系ペプチドについてはフッ化アナログの合成を検討した。内容を以下の３点に要約する。
１．昨年度得たアタンシ(Brucea javanica の果実)メタノールエキスのHPLC分離画分をさらにHPLC精製することで、ブルサトールおよびその配糖体ブルセオシドAを得た。ブルセオシドAはブルセオシンおよびブルサトールへ変換後それぞれ精製した。
２．昨年度茜草根(Rubia cordifoliaの根)のメタノールエキスのクロマトグラフィーにより得た分離画分を精査することにより、新規ペプチド化合物３種を単離した。マススペクトル、IRスペクトルおよび各種二次元NMRスペクトルデータを解析したところ、これらの化合物はいずれも昨年度単離し、誘導体化後X線結晶解析により構造決定した化合物（デオキシボウバルジンのTyr-6のヒドロキシ基の酸素原子にフェニルプロパノイドのβ位炭素原子が結合した構造）の立体異性体と考えられた。
３．RA-VIIの生体内代謝において起こる分子中のメチルエーテルの脱O-メチル化による不活性化を抑制する目的で、RA-II、デオキシボウバルジン、およびデス-O-メチルデオキシボウバルジンより、それぞれRA-VIIのTyr-3、Tyr-6、およびTyr-3とTyr-6の両方のメトキシ基のメチル基がフルオロメチル基あるいはジフルオロメチル基で置換したアナログを合成し、HL-60細胞に対する細胞毒性試験を実施した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
今年度は新型コロナウイルス感染症のため研究施設へのアクセスも制限された期間があったため、予定どおり研究を進捗させることができなかった。とりわけブルサトール類については原料の供給は十分に達成できたものの、フッ化アナログ合成について反応実験を開始するには至らなかった。一方、RA系ペプチドについては、フルオロメチルエーテルおよびジフルオロメチルエーテルアナログの合成と活性評価、3種の新規RA系ペプチド化合物を単離するなどの成果が得られた。
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| 今後の研究の推進方策 |
ブルサトール系カッシノイドについては、先ず種々のフッ素化試薬を用いてブルサトール、デヒドロブルサトール、およびブルセオシンのA環部へ直接フッ素原子の導入を試みる。直接の導入が困難な場合は、A環部の３位（または２位）ヒドロキシ基、C環部の１１位、１２位ヒドロキシ基等に保護基を導入したのちフッ素化反応を検討する。フッ素原子の導入位置と立体配置については、NMRスペクトルおよびMacroModelを用いた配座解析により決定する。並行してアタンシエキス分離画分をHPLCにより精製することで、原料化合物であるブルサトール、ブルセオシド類を供給する。
RA系ペプチドについては、デオキシボウバルジンを原料とした種々のフッ素化試薬による芳香環の直接フッ素化反応を検討する。また、セリン残基を有するRA-IIIの側鎖ヒドロキシ基のフッ素原子への置換反応を検討する。天然RA系ペプチドの直接フッ素化が困難な場合は、フッ素原子を組み込んだアミノ酸ユニットへの置き換えなどによりフッ化アナログの合成を試みる。本年度ペプチド成分の分離過程で得た新規RA系ペプチド化合物３種について、それらの立体配置の決定と細胞毒性活性を評価する。原料供給のためHPLCによる天然RA系ペプチド化合物の単離・精製作業を継続する。併せて微量成分についても単離・精製し、新規化合物については二次元NMRスペクトル、マススペクトル、X線結晶解析等を用いて構造決定を行う。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
今年度は新型コロナウイルス感染症による影響で研究を予定どおり進捗させることができなかったこと、ならびに本年度使用した試薬類等はいずれも保有していたものを使用したため、69,002円の差額が生じている。次年度に、次年度分として請求した助成金と併せてMacroModelソフトウエアの年間使用料（今年度価格改訂により金額が上昇）等に使用する予定である。
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