| 研究課題/領域番号 |
19K07171
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| 研究機関 | 国際医療福祉大学 |
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研究代表者 |
八木 秀樹 国際医療福祉大学, 薬学部, 教授 (40250740)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2023-03-31
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| キーワード | リンパ節転移 / LYVE-1 / トリプルネガティブ乳癌細胞 |
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| 研究実績の概要 |
近年の癌治療法の進歩によって、遠隔転移が患者の予後を大きく左右する重要な因子となってきた。そこで、乳癌リンパ節転移モデルを用いて、その転移機構を明らかにし、新規転移抑制薬の開発を目指すことを本研究の目的とする。申請者が樹立した高リンパ節転移ヒト乳癌細胞株を移植することで、自然にリンパ節転移が生じる転移モデルを用いて、申請者は研究を行ってきた。このリンパ節高転移株MDA-MB-231-LN（MDA-LN）の同所性移植腫瘍内にリンパ管が多数存在することから、MDA-LN細胞はリンパ管新生因子を産生しているものと考えた。一方、このMDA-LN細胞から既知のリンパ管新生因子であるVEGF-C, -Dの産生を認めな
かったことから、新たなリンパ管新生因子の産生が示唆された。本研究では新規リンパ管新生因子の探索を行う。その結果、転移メカニズムを解明、その治療標的分子の探索につなげる。
2020年度にリンパ管内皮細胞株SVEC4-10を用いて、wound healing assayを行うことにより、親株と比して高転移株であるMDA-LN細胞の培養上清を添加することで、細胞遊走性が上がること見出した。2021年度はさらに実験結果の精度を上げるとともに、培養上清の分画とその遊走活性との相関を見出そうと試みたが、思うように進捗しなかった。一方で、LYVE-1分子がこの遊走に関与する結果が得られた。我々はすでに抗LYVE-1抗体の作製に成功しており、この点も詳細に詰めていくことが今後の課題である。また、多くの乳癌細胞を用い、癌幹細胞性についてCD44R1 (v8-v10)の発現やside population細胞の有無などで検証したところトリプルネガティブ乳癌細胞株で癌幹細胞性が高いこと、MDA-LN細胞でも高いことが判明した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
Covid-19感染症に対する感染予防策の実行などで、研究室の使用制限等もあり、研究が思うように進まなかった。
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| 今後の研究の推進方策 |
2021年度までに、MDA-LN細胞の培養上清中にリンパ管内皮細胞の遊走活性を示す因子の存在が確認された。また、癌幹細胞性についてもトリプルネガティブ乳癌細胞株で確認したところ、検索した3つの細胞株共に癌幹細胞性が高く、特にMDA-LN細胞で高いことが判明した。2022年度ではMDA-LN細胞の培養上清をイオン交換クロマトグラフィーにより分画し、リンパ管内皮細胞SVEC4-10を用いて、その遊走活性や管腔形成能などを指標に性状解析する。これとともに、MDA-LN細胞の培養上清中に含有されるリンパ管新生因子等によるLYVE-1分子に対する作用についても、LYVE-1遺伝子導入細胞や抗LYVE-1モノクローナル抗体を用いて、詳細に検討する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
Covid-19感染症により、研究計画が大きく遅延したために、次年度への繰り越し研究を継続させたい。次年度は特にMDA-LN細胞の培養上清の分画とリンパ完新生因子の同定を行う。
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