| 研究課題/領域番号 |
19K07246
|
|---|
| 研究機関 | 神戸大学 |
|---|
研究代表者 |
今崎 剛 神戸大学, 医学研究科, 特命助教 (60631661)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2022-03-31
|
| キーワード | 転写 / クライオ電子顕微鏡単粒子 / 超分子複合体 / 難溶性タンパク質 |
|---|
| 研究実績の概要 |
RNAポリメラーゼIIの活性は20以上のサブユニットから構成される超分子複合体、転写メディエーター複合体により制御されている。転写メディエーター複合体CDKモジュール(以下CDKM)は転写メディエーター複合体を構成するモジュールの一つで、転写メディエーター複合体の活性のON/OFFを切り替える重要因子である。本研究ではCDKMの高分解能構造解析を目指し、その構造機能の解明を目指している。
CDKMの組換えタンパク質発現系を用いた調整は非常に困難であったが、新規の超分子複合体発現方法の確立しこの問題を解決した。この方法については特許申請中である(PCT/US2018/047193)。そのサンプルを用いてSPring-8のThermo Fisher製クライオ電子顕微鏡Glaciousを用い、クライオ電子顕微鏡単粒子解析を行い構造解析に成功した。タンパク質調整法の開発、構造解析について論文化を急ぐ。
|
| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
超分子複合体発現が困難な理由は、多数あるサブユニットの中で難溶性のサブユニットがあることに依ることが多い。我々は難溶性タンパク質の発現を助けるタグを開発し、CDKMの発現に応用することにより、高品質のCDKMの調整に成功した。本方法は特許申請し内容は最近公開された (PCT/US2018/047193)(現在申請中)。また高品質なCDKMを用いてクライオ電子顕微鏡単粒子解析による構造解析を行い成功した。
|
| 今後の研究の推進方策 |
難溶性タンパク質の発現を助けるタグを用いたCDKMの調整法、CDKMの構造解析について早急に論文化を行う。
|
| 次年度使用額が生じた理由 |
コロナの影響で学会参加や実験のために確保した旅費が想定よりかからなかったため。翌年度に成果発表や論文化費用として使用する予定。
|
