転写メディエーター複合体の転写制御機構の解明

2021 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 19K07246
• 研究機関: 神戸大学
• 研究代表者: 今崎 剛 神戸大学, 医学研究科, 特命助教 (60631661)
• 研究期間 (年度): 2019-04-01 – 2022-03-31
• キーワード: 転写 / クライオ電子顕微鏡単粒子 / 超分子複合体 / 難溶性タンパク質

研究実績の概要

RNAポリメラーゼIIの活性は20以上のサブユニットから構成される超分子複合体、転写メディエーター複合体により制御されている。転写メディエーター複合体 CDKモジュール(以下CDKM)は転写メディエーター複合体を構成するモジュールの一つで、転写メディエーター複合体の活性のON/OFFを切り替える重要因子である。本研究ではCDKMの高分解能構造解析を目指し、その構造機能の解明を目指した。

CDKMの組換えタンパク質発現系を用いた調整は非常に困難であったが、新規の超分子複合体発現方法の確立しこの問題を解決した。この方法については特許申請中である(PCT/US2018/047193)。そのサンプルを用いてSPring-8のThermo Fisher製クライオ電子顕微鏡Glaciousを用い、クライオ電子顕微鏡単粒子解析を行い構造解析に成功した。前年度から解析ソフトウェアの新機能を適用することにより分解能向上に成功した。タンパク質調整法の開発、構造解析について論文化を行っている。論文化を急ぐ。

研究成果

• [国際共同研究] indiana university(米国)
  • 国名: 米国
  • 外国機関名: indiana university
• [雑誌論文] Structural model of microtubule dynamics inhibition by Kinesin-4 from the crystal structure of KLP-12 ?tubulin complex (2022)
  • 著者名/発表者名: Taguchi Shinya、Nakano Juri、Imasaki Tsuyoshi、Kita Tomoki、Saijo-Hamano Yumiko、Sakai Naoki、Shigematsu Hideki、Okuma Hiromichi、Shimizu Takahiro、Nitta Eriko、Kikkawa Satoshi、Mizobuchi Satoshi、Niwa Shinsuke、Nitta Ryo
  • 雑誌名: bioRxiv 巻: 0 ページ: 0
  • DOI: 10.1101/2022.02.14.480441
• [雑誌論文] CAMSAP2 organizes a γ-tubulin-independent microtubule nucleation centre (2021)
  • 著者名/発表者名: T Tsuyoshi、Kikkawa S、Niwa S、Saijo-Hamano Y、Shigematsu H、Aoyama K、Mitsuoka K、Aoki M、Sakamoto A、Tomabechi Y、Sakai N、Shirouzu M、Taguchi S、Yamagishi Y、Setsu Tomiyoshi、Sakihama Y、Shimizu T、Nitta E、Takeichi M、Nitta R
  • 雑誌名: bioRxiv 巻: 0 ページ: 0
  • DOI: 10.1101/2021.03.01.433304
• [学会発表] CAMSAP2による微小管形成機構の解明 (2022)
  • 著者名/発表者名: 今崎 剛
  • 学会等名: 第126回日本解剖学会総会・第98回日本生理学会大会
• [学会発表] クライオ電子顕微鏡を用いた In Situ 観察の生物学、医学への応用 ～実際の実験するとき気をつけていること～ (2022)
  • 著者名/発表者名: 今崎 剛
  • 学会等名: 日本顕微鏡学会 生体解析分科会研究会 on-lineミニシンポジウム（Live） 「バイオ向けクライオ透過電子顕微鏡の多様性の最前線２」
  • 招待講演
• [学会発表] クライオ電子顕微鏡を用いた In Situ 観察の生物学、医学への応用 (2021)
  • 著者名/発表者名: 今崎 剛
  • 学会等名: 日本顕微鏡学会 第 64 回シンポジウム
  • 招待講演
• [学会発表] 微小管を軸とした細胞極性形成機構の解明に向けて (2021)
  • 著者名/発表者名: 今崎 剛
  • 学会等名: 関西共創の場 第4回若手人材育成セミナー
  • 招待講演