| 研究課題/領域番号 |
19K07262
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| 研究機関 | 群馬大学 |
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研究代表者 |
向後 寛 群馬大学, 大学院医学系研究科, 講師 (20282387)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | 対合チェックポイント / 減数分裂 / リン酸化 / ゲノム編集 / モノクローナル抗体 |
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| 研究実績の概要 |
哺乳類の減数分裂に必須なタンパク質であるHORMAD1やその近縁分子で減数分裂チェックポイントに必要なHORMAD2は複数のリン酸化修飾を受けることが知られているが、各リン酸化の機能的意義はほとんど明らかにされていない。以前の研究で、HORMAD2の１ヶ所のリン酸化部位(Ser284)について、ゲノム編集により非リン酸化型(Ala284)とリン酸化模倣型(Asp284)に改変したマウスを作製して表現型解析を行い、非リン酸化型HORMAD2マウスの卵巣では卵母細胞の細胞死がやや亢進し、逆にリン酸化模倣型HORMAD2マウスの卵巣では対合不全による細胞死が部分的に抑制される、という予備的な結果を得ていた。今年度は、リン酸化部位変異体の表現型がより明確になることを期待して、マウスHORMAD2のC末端付近の３ヶ所のリン酸化部位(Ser284/287/288)全てをゲノム編集により非リン酸化型(Ala284/287/288)とリン酸化模倣型(Asp284/287/288)に改変したマウスの作製を行い、その確立に成功した。これらは卵母細胞における対合チェックポイントの分子機構におけるHORMAD2のリン酸化の機能的意義を解析するために必須のモデルマウスであり、今後の研究の進展に重要なステップをクリアできたと考えている。現在、遺伝的背景の均一化を行いながら表現型解析を始めているところで、順調に進展している。一方、もう一つの目標であったリン酸化状態特異的モノクローナル抗体の作製については、まだ着手できておらず、次年度以降に抗体の作製とその抗体を用いたリン酸化動態の解析を進めていく予定である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
HORMAD2の３ヶ所のリン酸化部位について、非リン酸化型とリン酸化模倣型に改変したマウスを１年目の時点で作製を完了できたことは、当初の想定以上の進展である。一方、HORMAD2の2種類のリン酸化状態それぞれに特異的なモノクローナル抗体の作製についてはやや遅れが生じている。従って、全体としては概ね順調に進展していると考えている。
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| 今後の研究の推進方策 |
マウスHORMAD2の２種類のリン酸化状態に特異的なモノクローナル抗体を作製し、免疫組織染色による形態学的解析を進める。同時に、非リン酸化型とリン酸化模倣型の変異体マウスを作製できたので、これらの変異体と結合するタンパク質（複合体）を免疫沈降法などにより同定をすることで、HORMAD２のリン酸化の機能的意義の解析を進めていきたい。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
モノクローナル抗体の作製に着手できていないため、次年度使用額が生じたと考えられる。次年度にモノクローナル抗体の作製に使用したい。
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