|
本研究では、受容体型チロシンフォスファターゼの網羅的な基質同定を試みるものである。特にコンドロイチン硫酸・へパラン硫酸という硫酸化糖鎖を受容体として、中枢神経損傷後の神経軸索再生阻害に関わる受容体型チロシンフォスファターゼであるPTPσの細胞内基質を網羅的に同定することを目指す。
昨年度までの研究において、近位依存性ビオチンラベル法によりPTPσ相互作用分子の解析を行い、約100の候補分子をリストアップした。さらにその中で特に神経細胞において発現しており神経軸索の伸長に関与しているものの、これまでチロシンリン酸化・脱リン酸化による制御の報告が乏しい分子についていくつか選択し解析を行った。
本年度は、さらにこの中でAPBB1（Amyloid beta precursor protein binding family B member 1）の機能解析を行った。APBB1はそのノックアウトによりマウスにおいて軸索投射異常を起こす細胞質タンパク質である。まずリン酸化プロテオミクス解析を行い、チロシン117、270、543のチロシンリン酸化とPTPσによる脱リン酸化を確認した。さらにこれらのフェニルアラニン置換体を作成し、細胞内でもリン酸化されうることを確認した。さらに初代培養脊髄後根神経節細胞においてAPBB1をノックダウンすることにより、軸索伸長が優位阻害されることを確認した。
今後さらに変異体を用いた解析やin vivoの解析を行い、PTPσによるAPBB1脱リン酸化の制御とその意義を特に中枢神経損傷後の神経軸索再生にフォーカスして検証していく。
|
