| 研究課題/領域番号 |
19K07360
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| 研究機関 | 北里大学 |
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研究代表者 |
藤倉 大輔 北里大学, 獣医学部, 准教授 (70547794)
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| 研究分担者 |
北村 浩 酪農学園大学, 獣医学群, 教授 (80312403)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2023-03-31
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| キーワード | TNFRSF21 |
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| 研究実績の概要 |
昨年度においては、CRISPR/Cas9法により作成したDR6欠損あるいは野生型Balb/cマウス系統に、CT26細胞を皮下シンジェニック移植し、人道的エンドポイントに達する移植後25日前後まで腫瘍塊の径を経時的に計測観察するとともに、最終日にそれぞれのマウス系統に安楽死処置を施し、腫瘍塊を採取し、腫瘍重量を計測し、得られた結果をマウス系統間で比較することにより、宿主側DR6遺伝子の有無が腫瘍形成過程に与える影響を評価した。次に、それぞれのマウス系統から採取された腫瘍塊を酵素処理によりほぐした後に、宿主由来単球の腫瘍への集族度合いをFlowcytometry法により解析するなど、生体あるいは細胞レベルでの解析を行った。
本年度においては、CT26細胞を同様に移植したDR6欠損あるいは野生型Balb/cマウス系統に形成された腫瘍塊から、宿主由来単球を免疫磁気ビーズ法により採取し、これらの単球からRNAをTrizol法により抽出および精製し、得られたRNAよりcDNAライブラリーを作成し、RNAseq法による網羅的遺伝子発現解析を行った。DR6欠損あるいは野生型Balb/cマウス系統由来単球由来細胞の遺伝子発現について一定のデータが得られたが、想定より個体差が大きく、再現性を確認するに至らなかった。研究期間の延長申請を行い、承認を受けたため、次年度においては、DR6欠損あるいは野生型Balb/cマウス系統それぞれの供与個体数を増やして再現実験を行い、最終的な解析結果を得る。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
RNAseq解析に於いて、当初想定より個体差が大きく、再現性を確認する必要が生じたため。
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| 今後の研究の推進方策 |
経費節減努力によって生じた残予算を用いて、追加実験を行う。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
経費削減努力により残が生じた。研究期間延長の承認を受け、延長期間中の計画遂行の経費に残を用いる。
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