リコンビナント・インブレッド系マウスを用いた膠原病治療モデルのゲノム病理学的解析

2019 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 19K07478
• 研究機関: 岐阜大学
• 研究代表者: 宮崎 龍彦 岐阜大学, 医学部附属病院, 准教授 (80239384)
• 研究期間 (年度): 2019-04-01 – 2022-03-31
• キーワード: 実験病理学 / 膠原病治療モデル / リコンビナント・インブレッド / ゲノム病理学的解析 / 蛋白アナログ

研究実績の概要

１．Opn-インテグリン結合阻害蛋白の確立：すでにこれまでの研究でOpnの蛋白多型が自己免疫性糸球体腎炎感受性を規定すること、それをブロックする蛋白アナログを明らかにしており、さらに低分子化をはかったアミノ酸をデザインし、コムギ胚芽を用いた無細胞蛋白合成システムを用いて合成し、in vitroでOpn-インテグリン結合阻害効果の検証を行った。in vitro実験で効果の見られた数種類の蛋白アナログのうち一種類について、in vivoでリンパ節投与、静脈投与、腹腔内投与し、効果を比較した。
２．自己抗原エピトープデコイ蛋白の確立：腎炎原性自己抗原であるRRP8とTNP1に対するデコイ蛋白を確立するために、無細胞蛋白合成システムで合成したRRP8およびTNP1について全長および一部のタンパクを合成し、血清との反応性を免疫沈降法で解析し、反応性のあるfragmentをデコイ蛋白として絞り込む作業の一部を行った。
３．Opn-インテグリン結合阻害蛋白、自己抗原デコイ蛋白、およびシクロフォスファミド投与による膠原病治療モデルの実施と、治療反応性の解析：4ヶ月齢～６ヶ月齢の腎炎発症した個体を使用する。Opn-インテグリン結合阻害蛋白、自己抗原デコイ蛋白または陽性コントロールとしてシクロフォスファミドを経尾静脈的、経左鼠径部リンパ節的もしくは腹腔内に投与した。陰性コントロールとしては同様に生理食塩水を投与した。二ヶ月間薬剤を投与し、投与期間中の尿蛋白、体重を測定した。投与終了後速やかに剖検して腎臓および、血管、関節、唾液腺、涙腺の各臓器病変について組織学的に評価している。さらに、剖検時に血清を採取し、腎機能、炎症マーカー、免疫グロブリン、補体を定量した。

現在までの達成度 (区分)

3: やや遅れている

理由

Opn-インテグリン結合阻害蛋白の低分子化を図っているが、in vitroでの阻害効果の検証にやや手間取っている。また、RRP8およびTNP1のデコイ蛋白の合成につき、年度末からコロナ感染防止のために、共同研究部分がやや滞っている。その代わりに、既存の投与系へのin vivo解析をn数を増やして先行させ、データ解析を進めている。

今後の研究の推進方策

低分子化した結合阻害蛋白、デコイ蛋白の合成を急ぎ、今年度にはそれらを用いたin vitro, in vivoの解析を大幅に進捗させたい。また、in vivoの投与系でリコンビナント系マウスの系統間での治療効果の差について、その背景遺伝子の関与につき、予定通りの解析を進めていく。

研究成果

• [国際共同研究] German Cancer Research Center/Georg-August University Goettingen(ドイツ)
  • 国名: ドイツ
  • 外国機関名: German Cancer Research Center/Georg-August University Goettingen
• [雑誌論文] Proinflammatory Cytokine Secretion in a Patient With Recurrent Neuroblastoma Related to the Onset of Malignancy-associated Hemophagocytic Lymphohistiocytosis (2020)
  • 著者名/発表者名: Nozawa, A. Ozeki, M. Yasue, S. Endo, S. Ohe, N. Miyazaki, T. Fukao, T.
  • 雑誌名: J Pediatr Hematol Oncol 巻: 42 ページ: e199-e201
  • DOI: 10.1097/MPH.0000000000001617
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] JCS 2017 Guideline on Management of Vasculitis Syndrome- Digest Version (2020)
  • 著者名/発表者名: Isobe, M. Amano, K. Arimura, Y. Ishizu, A. Ito, S. Kaname, S. Takahashi, K. Tanemoto, K. Hasegawa, H. Harigai, M. Fujimoto, S. Miyazaki, T. et.al.
  • 雑誌名: Circ J 巻: 84 ページ: 299-359
  • DOI: 10.1253/circj.CJ-19-0773
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Multi-institutional re-evaluation of prognostic factors in chromophobe renal cell carcinoma: proposal of a novel two-tiered grading (2020)
  • 著者名/発表者名: Ohashi, R. Martignoni, G. Hartmann, A. Calio, A. Segala, D. Stohr, C. Wach, S. Erlmeier, F. Weichert, W. Autenrieth, M. Schraml, P. Rupp, N. J. Ohe, C. Otsuki, Y. Kawasaki, T. Kobayashi, H. Kobayashi, K. Miyazaki, T. Shibuya, H. Tsuzuki, T. Nagashima, Y. Ajioka, Y. Moch, H. et al.
  • 雑誌名: Virchows Arch 巻: 476 ページ: 409-418
  • DOI: 10.1007/s00428-019-02710-w
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] Classic Chromophobe Renal Cell Carcinoma Incur a Larger Number of Chromosomal Losses Than Seen in the Eosinophilic Subtype (2019)
  • 著者名/発表者名: Ohashi, R Schraml, P Angori, S Batavia, Aashil A Rupp, NJ Ohe, C Otsuki, Y Kawasaki, T Kobayashi, K Miyazaki, T Shibuya, H Nagashima, Y, Ajioka, Y, Moch, H et al.
  • 雑誌名: Cancers (Basel) 巻: 11 ページ: 1492-1505
  • DOI: 10.3390/cancers11101492.
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [学会発表] リンパ系ドラッグデリバリーによる腎炎・腎血管炎治療モデルの開発 (2020)
  • 著者名/発表者名: 宮崎 龍彦, 小林 一博, 酒々井 夏子, 松本 宗和, 新居 俊典
  • 学会等名: 第109回日本病理学会総会
• [学会発表] OMAAVの上気道生検組織の組織学的パラメーターの萌芽的解析 (2019)
  • 著者名/発表者名: 宮崎 龍彦, 小林 一博, 久松 憲治, 酒々井 夏子, 松本 宗和, 武曾 恵理, 小川 弥生, 中沢 大悟, 石津 明洋
  • 学会等名: 第108回日本病理学会総会
• [学会発表] 組み換え近交系膠原病マウスを用いた新規ドラッグデリバリーモデル治療モデル (2019)
  • 著者名/発表者名: 小林 一博, 酒々井 夏子, 浅野 奈美, 久松 憲治, 松本 宗和, 宮崎 龍彦
  • 学会等名: 第108回日本病理学会総会
• [図書] 組織細胞化学2019 (2019)
  • 著者名/発表者名: 宮崎龍彦 他 （日本組織細胞化学会 偏）
  • 総ページ数: 232
  • 出版者: 学際企画
  • ISBN: 978-4906514946