| 研究課題/領域番号 |
19K07558
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| 研究機関 | 福島県立医科大学 |
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研究代表者 |
鈴木 倫毅 福島県立医科大学, 医学部, 助教 (80456649)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | クラミジア / 核内構造 |
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| 研究実績の概要 |
クラミジアは偏性寄生性細菌であり、宿主細胞の様々な機能を巧妙に支配することで、細胞内への侵入および増殖を行なっている。近年、宿主細胞の様々なタンパク質を支配するメカニズムが明らかにされてきているが、核内タンパク質や宿主の遺伝子発現を制御するメカニズムは未解明である。今回の研究は、この核内制御に主眼をおいたものである。
初年度は、クラミジア・トラコーマティス感染細胞における核小体、Cajal bodyやPML nuclear bodyなどの核内構造体およびクロマチン構造の変化に着目し、各々の構造体を形成するタンパク質にGFPタグをつけ、その形態変化のスクリーニングを行った。その結果、PML nuclear bodyが感染後24時間以降に大きくなることを見出した。2年目である本年度は、初年度で見出したPML nuclear bodyに着目した。PML nuclear body を形成するPMLタンパク質は、スプライシングにより7種類存在することが知られているが、発現実験により中でもPML-Ⅰが関与することが判明した。また、HeLa細胞及びA549細胞にクラミジア・トラコーマティス(L2 434/Bu株)を感染させ、PML抗体を用いることで内在性のPML nuclear bodyの変化を観察したところ、どちらの細胞においても感染後24時間以降で大きくなることを確認した。しかし、残念ながらPMLノックアウト細胞を作成し、クラミジア感染効率及び増殖への影響を検討したが、野生型細胞と比較し、大きな変化は見られなかった。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
本研究課題は、宿主細胞の核/核内構造体変化に注目し、新たなクラミジア感染メカニズムを見出すことを目的としている。初年度の研究成果を受け、クラミジア感染時に変化を起こした核内構造体を形成するタンパク質をCRISPR/Cas9ノックアウトシステムでHeLa細胞とA549細胞でノックアウトし、クラミジア感染・増殖への影響を検討したが、残念ながら大きな変化は得られなかった。したがって、現段階において、大きくクラミジア感染・増殖に関与する核内構造体は見出されていない。
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| 今後の研究の推進方策 |
2019年度、2020年度の結果を受け、クラミジア感染・増殖に影響する新たな核内局在宿主因子もしくはクラミジア因子を探索する必要がある。
近年、様々な手法によりクラミジア感染・増殖に関与する宿主因子のスクリーニングが行われ、報告されている。そこで、これらの結果を元に、核内に局在することが知られている分子をターゲットとし、クラミジア感染・増殖に関与する新たな宿主因子を同定する。
また、新規の核内局在クラミジア因子を同定するために、宿主細胞の核内局在BioIDを作成し、クラミジア感染させることで網羅的にクラミジアタンパク質を同定する。これにより、過去に報告のないクラミジアタンパク質をターゲットとし、新たなメカニズムを改名できると考えている。
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