| 研究課題/領域番号 |
19K07578
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| 研究機関 | 岐阜薬科大学 |
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研究代表者 |
井上 直樹 岐阜薬科大学, 薬学部, 教授 (90183186)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | サイトメガロウイルス / 先天性感染 / モルモット / 動物モデル / 感染防御 / 免疫回避 / 胎盤 |
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| 研究実績の概要 |
サイトメガロウイルス(CMV)が妊婦に感染すると難聴や精神発達遅滞などの神経学的障害をもたらすため、ワクチンの開発が求められている。本研究は、妊娠モルモットにモルモットCMV(GPCMV)をさせる先天性感染モデルを用いて、1)感染防御に関わる免疫指標測定系の確立、2)胎盤NK(dNK)細胞の活性化機序の解析、3)感染に伴う胎盤での遺伝子発現変化の同定と変化した遺伝子の機能解析、4)免疫回避関連遺伝子破壊ウイルスの個体での感染・伝播の解析などにより、先天性CMV感染に対する宿主免疫とCMVの免疫回避機構を明らかにすることを目的とする。
今年度の進捗は以下の通り。1)については、モルモットにおける抗体依存性細胞傷害(ADCC)測定系、抗体依存性貪食(ADCP)測定系、ELISPOT法の構築のために、FcγIIIA受容体とCD3ζのモルモットホモローグのクローニング、EGFP融合カプシド蛋白発現GPCMVの構築とFACSを用いたADCP測定系への適用、ELISPOT法に必要な抗体作製を目的としたモルモットIFNγならびにTNFαのクローニングとGST融合蛋白の発現を行った。2)については、モルモットdNK細胞の同定が、市販の特異抗体がないために難航している。3)については、モルモット胎盤由来不死化細胞株を樹立し、この細胞での感染の解析を進めている。4)については、GPCMVがコードする遺伝子群で機能が決定されておらず免疫回避関連遺伝子が含まれる可能性がある２つの遺伝子領域の解析を行い、細胞死阻害に関与するvMIAのホモローグであるgp38.1、Fcγ結合蛋白と予測されるgp119などをコードする遺伝子のcDNA構造をRACE法により決定した。一過性発現系を用いて、両遺伝子産物の特性を明らかにした。gp38.1破壊株は細胞培養系・モルモット個体いずれにおいても増殖能が減少した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
dNK細胞の同定は難航しているが、その他の研究内容は予定した計画に沿って、順調に進んでいる。特に細胞死阻害に関与するvMIAのホモローグであるgp38.1については、細胞培養系でBAXとの相互作用を明らかにしたのみならず、個体において脾臓でのウイルス増殖における重要性などを明らかとした(投稿準備中）。
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| 今後の研究の推進方策 |
令和元年度の継続を含め、当初の計画通り研究を行う。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
投稿論文の受理が今年度か来年度か不明であったため、掲載にかかる費用をとり置いたため。5月現在受理されているので、令和2年度に支払を行う。
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