| 研究課題/領域番号 |
19K07583
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| 研究機関 | 国立感染症研究所 |
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研究代表者 |
村松 正道 国立感染症研究所, ウイルス第二部, 部長 (20359813)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | hepatitis B virus / integration / chronic hepatitis / cccDNA / tumorigenesis |
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| 研究実績の概要 |
B型肝炎ウイルスやパピローマウイルスなどの小型DNA型腫瘍ウイルスは、それぞれ肝細胞癌や子宮頸がんを起こすが、その発癌の過程でウイルスゲノムDNAが宿主細胞のゲノムに挿入される。挿入されたウイルスゲノム上にはウイルス由来がん遺伝子があることから、挿入の結果、がん遺伝子産物が恒久的に発現することとなる。恒久的がん遺伝子発現と挿入部位の遺伝子発現が乱れることと相まって、癌ゲノム進化が大きく進むとされており、この分子機構の解明が重要となってくる。
本研究では、主に培養細胞系を中心として臨床検体やマウス検体を用いつつ、この分子機序の解明に取り組む。この分子機序解明の１つの律速段階が、ウイルスゲノム挿入の検出方法であり、これまでの方法は、感度や定量性、煩雑さなど様々な問題があることが知られている。今年度は、昨年度新たに開発した新規ゲノム挿入検出方法を用いて、以下の実験を行った。１、HBVのゲノム挿入がある培養細胞を用いて実際にゲノム挿入が検出できるか検討、２、HBV感染受容体発現肝細胞株や初代肝細胞を用いた感染実験でのウイルスゲノム挿入の検討、３、ヒト肝キメラマウスの動物HBV感染モデルでの検証。 これら３系統の実験において新規ゲノム挿入検出方法でウイルスゲノム挿入を捉えることができた。ゲノム挿入機序の分子メカニズムに近づくには、方法論の効率化や、定量性の向上、既存の方法との比較などが必要で、その点は現在進行中である。一方、臨床検体で検出できるかも病体解析に応用する上で重要な点であるので、今後、プロトコールの改良に取り組む。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
分子機序解明をめざしており、ウイルスゲノム挿入を決める因子の同定を１つの目標にしている。現時点でその因子の同定に至っていないので、そこに至っていないという意味でやや遅れているとした。感染実験系にて観察されるゲノム挿入現象の頻度が候補因子の発現の有無で変化するかで因子の同定をめざしたい。そのためにはゲノム挿入頻度を適切に評価できるよう検出系をさらに改良する必要がある。
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| 今後の研究の推進方策 |
ゲノム挿入頻度を簡便に定量的に測定できる方法論があると本研究は大きく進むと考えられる。本研究で開発した方法論以外に、新規方法論としてウイルス側にマーカー遺伝子を挿入し、そのマーカー遺伝子を利用して定量的にウイルスゲノム挿入を測定する方法論の開発を着手した。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
次世代シークエンス外注の支払いに関連して、2020年度から2021年度へ持ち越しが派生した。
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