| 研究課題/領域番号 |
19K07601
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| 研究機関 | 公益財団法人東京都医学総合研究所 |
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研究代表者 |
小林 郷介 公益財団法人東京都医学総合研究所, 疾患制御研究分野, 主席研究員 (80644989)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2023-03-31
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| キーワード | EV71 / ウイルス / 宿主因子 |
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| 研究実績の概要 |
Enterovirus 71 (EV71)は手足口病の病原体であるが、諸外国において中枢神経合併症が公衆衛生上の大きな問題となっている。EV71の感染個体内における組織 指向性が、組織特異的に発現している宿主因子とEV71との相互作用に起因するという仮説に基づいて、EV71の標的組織における増殖性をモデル細胞株を用いて評 価し、ゲノムワイドノックアウトライブラリースクリーニングによってEV71の増殖に必要な宿主因子を同定し、その中から組織特異的な因子を発見することを最 終目標としている。
昨年度までに、神経特異的なEV71感染に複数の遺伝子候補を同定した。今年度はそれらの中からEV71の感染に関わる因子を絞り込んだ。方法は、同定した候補遺伝子のcDNAを発現ベクターにクローニングし、過剰発現細胞を調製した。それらの細胞に段階希釈したEV71を感染させ、CPEが出現する最大希釈率を求めた。また、同定した遺伝子のKO細胞をCRISPR/Cas9法で作製した。KO細胞のEV71感受性を同様にして測定し、感受性の低下を示す細胞を探した。その結果、EV71の感染効率に関与する宿主因子として2種類が有力候補として同定された。
今後は、KOマウスを用いて病態発症との関連を中心に解析を進める。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
本研究計画で目指した「EV71の組織指向性を規定する宿主因子の同定」として、二つの有力な因子を同定した。最終的な確認はKOマウスを用いた個体レベルの解析が必要だが期待は持てるため、概ね順調と判断した。
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| 今後の研究の推進方策 |
同定した因子のKOマウスを購入し、実験可能な頭数まで繁殖させる。その後、乳飲みマウス感染モデルにより、同定した遺伝子を欠損したマウスにおけるEV71病原性の減弱や、組織指向性の変化を病理学的に解析する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
新型コロナウイルス感染症による緊急事態宣言やまん延防止等重点措置に伴う出勤制限、時差出勤により、研究が遅延したため。実験に必要な試薬、器具、解析ソフト、論文投稿費用、学会参加費等に使用する。
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